一、方法确认的6个基本问题

1、什么是方法确认?（WHAT）

答ISO17025对方法确认的定义是:通过检验和提供客观证据，证实满足指定最终用途的特定要求。
包含三个重要组成部分:
(1)“特定的最终用途”，是从分析所要解决问题中产生的对于分析的要求；
(2)“客观证据”常表现为从有计划的实验过程中获得的数据，从中可计算出适当的方法性能参数；
(3)“证实”是通过将性能数据与诸如方法适用性方面的要求进行充分的比较来进行的。

2、为什么必须进行方法确认?（WHY）
答(1)因为在测量前，应确保它是正确的，确认可提供这种保证。确认可提供在质量控制中作为对照基础的数据。在生产环境中，生产者有责任对于产品质量给予合理关注。有时，方法确认是法规的要求。
(2)在测量方法性能参数时，通过数据的累积反映整体运行中方法的哪部分是稳定的，哪部分可能有问题。因此，可设计出合适的质量控制程序并实施。还可利用方法确认数据提供的信息评估不同实验室用不同方法所得样品分析结果的可比性。

3、何时进行方法确认?（WHEN）
答(1)方法研发过程；
(2)使用任一方法进行样品分析前；
(3)工作环境发生变化或长期停用后的再确认。

4、怎样进行方法确认?（HOW）
答(1)确定分析要求:调查客户要解决的问题，考察进行分析的原因，找出客户通过分析工作希望达到的目的，判断方法的哪些性能参数与工作有关，哪些目标值是必需的。
(2)设计一组实验。
(3)进行实验。
(4)使用数据评估适用性。
(5)做出确认说明，是对方法适用性的正面肯定。
(6)还可在方法研究的范围内进行更为广泛的确认，用以说明方法对各种基体类型、被分析物、浓度水平、精密度和准确度等的适用性。

5、方法的性能参数有哪些?（HOW MANY）
答(1)同一性确认(选择性/特异性)。
(2)正确度(偏差、回收率)，对计算被分析物或特性的绝对值是重要的。
(3)精密度(重复性、复现性)，在水平比研究中很重要。
(4)工作范围，大多数情况下都很重要。
(5)耐久性/抗干扰性，可以说明要对哪些参数进行控制，从而保持方法性能。
(6)灵敏度，医学和临床化学家把它作为可替代检测限的参数。

6、方法确认的工具有哪些？（TOOLs）
答（不限于以下这些）：
(1)标准和有证标准物质。
(2)空白。
(3)内部制备的标准物质和标记物。
(4)真实样品和富集样品。
(5)统计学知识。
(6)物理化学等原理的分析解释

二、与方法确认相关的6个概念

1、精密度
主要精密度测量包括重复性标准偏差Sr、复现性标准偏差SR,和中间精密。重复性Sr表示在短时间内由同一操作人员操作同一设备等在同一间实验室内观察到的变异性。Sr可以在一个实验室内评估，也可以通过实验室间研究来评估。
特定方法的实验室间的复现性标准偏差SR可能只能用实验室间研究的方法直接评估；它表示不同实验室分析同一样品的差异性。当实验室内的一个或几个因素（例如时间、设备和操作人员）发生变化时，中间精密度与所观察到的结果的变化有关；所得到的数值可能有所不同，这取决于那些因素是保持恒定的。
中间精密度评估通常是在实验室内获得的，但是也可以由实验室间研究取得。无论是通过独立方差合成的方法得到的，还是通过研究完整的操作方法获得的，分析过程所观察到的精密度是总体不确定度的基本分量。
2、偏差
分析方法的偏差通常是通过研究相关标准物质或通过加料研究而确定的。使用适当的标准数值来确定总体偏差，在建立对公认的标准的溯源性时很重要。偏差可以表示为分析回收率（观察值除以期望值）。偏差应小到可忽略或应加以修正，但不论何种情况，与偏差确定有关的不确定度始终是总不确定度的一个基本分量。
3、线性
线性是分析方法在测量一个区间内的浓度时的重要特性。对于纯标准或实际样品响应能否成线性是可以确定的。通常并不将线性量化，而是通过检验或使用非线性显著性检测来检查线性。显著的非线性通常使用非线性校准函数加以修正，或通过选择更严格的操作区间加以消除。残余的线性偏差通常是在计算覆盖几个浓度的总体精密度估计值或与校准有关的不确定度中充分考虑。
 

检出限
在方法确认中，通常确定检出限只是为了建立一个方法实际操作区间的下限。虽然接近检出限的不确定度在评估时需要仔细考虑和特别处理，检出限（无论它是如何确定的）与测量不确定度的评估没有直接关系。
 

稳健性
很多方法开发和方法确认方案中需要直接研究特定参数的灵敏度。通常通过初步的‘稳健性测试’来得到，即观察一个和多个参数变化的影响。如果影响显著（与稳健性测试的精密度相比较），就需要进一步详细研究来确定影响的大小，并因此选择一个所允许的操作区间。因此稳健性测试的数据也可提供关于重要参数影响的信息。
 

选择性/特定性
虽然定义不是很严格，但是这两个术语均指一个分析方法对所要求的被分析物的专一响应程度。典型的选择性研究中需要研究可能的干扰物的影响，通常采用在空白和被分析物加强型的样品中加入潜在的干扰物并观察其响应值。结果通常用于证明实际影响并不显著。然而，因为这种研究是直接测量响应值的变化，所以当干扰物的浓度范围已知时，有可能使用这些数据来评估与潜在的干扰物有关的不确定度。
 

三、标准方法证实和非标方法的确认应该如何做

标准方法的证实从以下7个方面着手
(1) 对执行新标准所需的人力资源的评价，即检测、校准人员是否具备所需的技能及能力；必要时应进行人员培训，经考核后上岗；
(2) 对现有设备适用性的评价，诸如是否具有所需的标准、参考物质，必要时应予补充；
(3) 对设施和环境条件的评价，必要时进行验证；
(4) 对物品制备，包括前处理、存放、辅助试剂等各环节是否满足标准要求的评价；
(5) 对作业指导书、原始记录、报告格式及其内容是否适应标准要求的评价；
(6) 对新旧标准进行比较，尤其是差异分析与比对的评价；
(7) 按标准要求进行完整模拟检测，出具完整结果报告。
标准方法证实应有相关的文件规定及其证实的记录，标准方法变更后应重新证实。
非标方法确认需从以下11方面进行

a) 方法适当的标识；
b) 方法所适用的范围；
c) 检测或校准样品是什么类型，以及对样品的描述；
d) 被测参数的范围；
e) 方法对仪器、设备的要求，包括仪器设备关键技术性能的要求；
f) 需要用到的的标准物质；
g) 方法对环境条件的要求，对环境稳定周期的要求；
h) 操作步骤，包括：
—样品的标志、处置、运输、存储和准备；
—检测、校准工作开始前需要进行的检查；
—检查设备工作是否正常，需要时，使用前之前对设备进行校准和调整；
—结果的记录方法；
—安全注意事项；
i) 结果接受（或拒绝）的准则、要求；
j) 需记录的分析数据；
k) 不确定度评定。