随着实验方法的大量开发和成熟，目前高效液相色谱在包括食品、药品、化工、生命、环境等领域内大量使用，其作为一种通用分析检测设备在高校、科研院所、医院、监管机构、工厂企业中广泛配置。高效液相在物质鉴别和含量检测等定性、定量分析中的使用方便快捷，如何确保高效液相检测质量也长期受到研究者的关注。根据《GB/T 16631-2008高效液相色谱法通则》规定，为保证数据质量，应验证新开发的分析方法（包括分析条件的改变），即使是法定方法（如专项标准）也应当由使用的实验室验证，实验室开发的方法（内部方法）在应用前也应验证[1]。目前，对于高效液相分析方法验证的理念已被研究者广泛接受，但对于实验过程中的质量控制的关注不多。本文对高效液相检测过程中的各种可行的质量控制手段进行了浅析，试图为高效液相检测质量控制提高提供一定的参考。

01系统适用性

系统适用性试验是确保使用的分析方法有效的基础，其对于色谱法而言尤为重要，在各国药典高效液相章节中均有专门的部分描述系统适用性。高效液相系统适用性试验要求，通常包括理论板数N、分离度R、拖尾因子T、重复性和灵敏度这5个参数，在检测开始前需要先确认系统适用性符合规定，才能保证检测结果的准确性[2]。根据研究趋势，应该从整体评价的角度看待系统适用性试验要求，而不是单独对各参数进行考察，各个参数有着紧密的相互关系，如：分离度是是柱效（理论板数）的函数；拖尾因子对于重复性直接相关，并影响分离度；灵敏度是保证上述参数有意义的基础，而柱效增高就会提高灵敏度[3]。

在实际的检测过程中，应加强对系统适用性试验的重视程度，针对性地作出规定，如在《中国药典分析检测技术指南》中规定：以色谱中最难分离物质对或与其相关的物质对的分离度和待测物质的精密度作为系统适用性试验首选参数；有关物质检查是规定灵敏度溶液信噪比不低于10；选择柱效、拖尾因子作为没有合适的物质对分离度时的备选参数[4]。

02空白分析

空白分析是以纯溶媒（或水）代替实际样品以与实际样品完全相同的方法步骤所测得的全分析过程的信号值（或相应的浓度值）。空白分析是长期以来检测质控的重要指标，其可用于估算方法的实测下限、反应实验室试剂、操作环境，多次空白分析结果应稳定并从样品检测值中扣除[5]。空白分析在高效液相检测过程中能区分样品基质的影响和整个分析过程的影响，而用纯溶剂作为空白可以将溶剂空白与设备的影响如进样污染、交叉污染分离开并获得溶剂空白[1]。对于高效液相梯度洗脱而言，进行空白分析是绝对需要的，如在《中国药品检验标准操作规范》2010版中规定，样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，如洗脱过程中基线漂移较大，亦可对色谱图进行空白扣除处理[6]。在实际操作中，在每次检测前进行空白分析也是必须的，必要时可以考虑先进一针流动相空白、再进一针溶剂空白，从而扣除流动相和溶剂空白。

03质控样品

在高效液相日常检测中，通常20个样品（或一段时间）应至少进一个质控样品和一个空白样品，用来控制数据的质量[1]。在样品稳定的情况下，质控样品可以用定量分析中的对照品溶液，而空白样品可以用空白分析的样品，通过色谱图的比对（或含量的回收率）来证明高效液相系统处于稳定的状态。若质控样品在间隔一段时间后脱稳，则需拒接接受该时间段所产生的数据。

04重复分析

重复分析在高校液相中包括平行样和重复样，高效液相含量测定时通常要求进双标双垟，进针次数可以根据系统适用性重复性结果调整。重复分析结果的允差必须满足一定的范围，以相对偏差RD或者相对标准偏差RSD来控制检测过程中可能的偏离。特别是对于含量分析而言，双标双垟的基础理念下，控制重复分析的偏差对于结果的可信度具有重要的意义。

05室内质量控制

室内质量控制是在医学实验室中常规使用的质控指标，其核心在于选择合适的质控材料，定期对每批样品包括空白（或阴性）和定量（或阳性）质控品判断检测允许总误差和检测是否处于在控状态[7]。对于高效液相检测而言，可以考虑使用不同等级的标准品（如质控使用ISO规定的三级标准品即可）对检测的精密度、相对准确性和稳定性进行定量、定期的考察。室内质量控制可以进一步发展为对实验室进行能力验证、建立实验室质量控制图，并可进行实验室间能力比对[8]。室内质量控制的理念近年来不断在各领域推广，国家监管部门和国际组织也经常举行医学检测实验室、授权检验机构的检测能力评定。

06不确定度评定

检测工作的本质是获得一定范围内的检测结果，但检测结果的误差必须要符合一定的范围才是有意义的，这就是检测的不确定度。2020版药典新增通则9098《药品检测结果不确定度评定指导原则》，其规定测量不确定度用于表征合理地赋予被测量之值的分散性，它是对被测量客观值在某一量值范围内的评估，是对测量结果质量的定量表征[9]。

引进不确定度评定理念是提高高效液相检测过程中的质量控制一种新方法。高效液相检测的不确定度来源主要来源于标准物质、工作曲线、样品称量、定容体积、样品制备和高效液相测试差异等检测的整个流程，对于每个步骤都需要进行适当的风险评估。根据新的研究趋势，风险评估、方法验证、不确定度评价可能正成为分析方法使用的最主要基本原则[10]。

07小结

高效液相色谱目前在检测工作中广泛使用，对检验进行质量控制是保证结果可靠、准确的基本要求。在高效液相检测过程中，通过综合使用系统适用性、空白分析、质控样品、重复分析、室内质量控制、不确定度评定等质控手段，根据实验室实际条件和风险评估原则选择适当的质控手段，从而保证高效液相检测过程中的质量，保证便捷、准确、稳定的高效液相检测结果。

[1] 中国国家标准化管理委员会. GBT16631-2008高效液相色谱法通则[S]. 2019.06.18

[2] 国家药典委员会. 通则0512高效液相色谱法. 中华人民共和国药典. 2015 年版四部[S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015:59-61.

[3] 李飞, 李云, 许真玉. 色谱系统适用性试验在分析方法使用中的重要性[J]. 中国新药杂志, 2019, 28(6):30-33.

[4] 国家药典委员会. 中国药典分析检测技术指南[S]. 北京: 中国医药科技出版社. 2017年, 187-188.

[5] 戴克慧, 方颂椽, 夏德祥. 质控工作中的空白值测定[J]. 上海环境科学,1986, 5(4):26-27.

[6]中国药品生物制品检定所，中国药品检验总所. 《中国药品检验标准操作规范》[S]. 北京: 中国医药科技出版社. 2010年, 86.

[7] 肖亚玲, 王薇, 王治国. ISO15189：2012与室内质量控制[J]. 临床检验杂志, 2014, 32(2):124-125.

[8] 卫生部临床检验中心，《临床实验室定量测定室内质量控制指南》[S].GB/T 20468-2006.

[9] 国家药典委员会. 《药品检测结果不确定度评定指导原则》（征求意见稿）[S]. http://www.chp.org.cn/view/ff80808161653a930163ba30c4d90358?a=BZFL. 2018.06.01

[10] Cavalier E , Rozet E , Dubois N , et al. Performance of iohexol determination in serum and urine by HPLC: Validation, risk and uncertainty assessment[J]. Clinica Chimica Acta, 2008, 396(1-2):0-85.