问：我的色谱柱大概只进了100次左右样品。然后，峰型开始变差，理论塔板数也变得很低。这是什么原因呢？

答：100次确实是非常短。在正常情况下，我们都希望色谱柱能使用更长久。为了确认是什么问题，我们需要先确定是否是你的方法导致了色谱柱寿命变短。

有两种情况：

1. 用于相同测试的之前的色谱柱是否可以使用更长时间。

2. 是否所有用于该方法的色谱柱，在运行大约相同针数时，都出现了相同问题。

在第一种情况下，应确保测试的所有条件都是一致的。样品组分是否发生了变化？样品中有强烈吸附污染物破坏了色谱柱性能。仪器流路中的密封件是否完好？脱落的密封件是否会堵塞色谱柱的过滤器和顶层填料，从而影响样品的分布。

如果能够合理的确保色谱条件没有发生任何变化，则可以保守的认为原因来源于填充床的物理损坏。包括在实验室或者运输过程中对色谱柱的粗暴处理（是否掉落？）或者是制造时产生的缺陷。此类缺陷无法通过标准色谱柱质量控制检测到，只有在使用后才能够显现出来。这种情况，色谱柱生产商将免费更换色谱柱。

问：这些制造商很好，但这不是我的问题。我的色谱柱总是只能使用很短的时间。有时是100次进样，有时是200次。我可以接收200次的进样，但只有100次真的是太少了。花费太昂贵。我需要怎么做？

答：我完全同意你的看法。我们一起要做的就是找到问题的原因，然后看看我们可以采取什么措施。

造成问题的最可能原因是样品成分吸附在色谱柱的顶部。可能由于他们在流动相中的溶解度低而沉淀，或者可能被强烈吸附。随着注入越来越多的样品，这些污染物会积聚在色谱柱的顶部，从而阻止样品合理的吸附和分布。这导致峰型变差。通常，这个问题伴随着背压的增加。

问：好的，可能就是这样。那么我该如何解决这个问题？

答：有几种方法可以防止这种情况的发生。一种是使用合适的样品制备技术来净化样品。使用具有类似化学性质的SPE柱为分离柱进行固相萃取可以很好地解决此问题。

另一种更好的方法是使用保护柱。预柱可以作为分析柱的顶部，在出现问题时将其替换。为了获得最佳性能，使用的保护柱应与分析柱具有完全相同的填料，并以与分析柱相同的高性能填料技术进行填料。如果使用由不同品牌的填料制成的预柱，则在分离能力和保护分析柱方面都无法获得最佳性能。另外，请勿使用较大的粒径。较大的颗粒或填充不好的预柱会导致谱带展宽，分离效果下降。

问：使用保护柱听起来不错。还有其他解决方案吗？

答：嗯，是的。还有其他几种可能性，但是它们都有缺点。

我不是提倡使用可能会溶解色谱柱顶部污染物的溶剂进行“冲洗”的方法。在许多情况下，此过程根本行不通。例如，如果沉淀在柱顶上的污染物是蛋白质，那么当您尝试将其冲洗时，由于变性甚至交联，因此可能无法再次溶解它们。此外，每次冲洗也将会移除水解键合相，否则该键合相在发生水解的位置处保持局部平衡。因此，重复冲洗实际上可以导致色谱柱加速老化。同样在冲洗后，必须用流动相重新平衡色谱柱，在某些情况下（如离子对色谱）可能会花费大量时间。

另一种经常尝试的方法是反冲洗。如果你用的溶剂不同于流动相，那么同样的反对理由也适用于色谱柱清洗。如果你只使用流动相，则需要很长的时间将污染物出去或可能根本不起作用。而且，任何反冲洗都会削弱色谱柱的性能。虽然现在的色谱柱填装的都很好，可以承受反冲洗，但我还是要重申，这不是一个标准做法。

问：所以，最好的建议是使用预柱？

答：是的。它们的价格不贵-视品牌和类型而定，在10到50美元之间-并且它们保护的色谱柱通常成本是其十倍左右。此外，它还可以保护色谱柱免受其他更难追踪来源的污染物的侵害。你的色谱柱问题的根源可能是例如流动相中的灰尘或泵密封垫脱落造成的碎屑导致。也可能是流动相中污染物的吸附。其中一些可能很难解决，但是预柱能够更好的解决这些问题。

问：还有其他导致色谱柱寿命缩短的原因吗？

答：是的，但是如果您听从制造商的建议，则不太可能。

一种可能是由于流动相pH值超出建议范围而导致色谱柱塌陷。这也可能是由于样品溶解在强酸或碱性溶液中引起的。

此外，还有一些色谱柱用于特定的项目。

例如氨基柱与醛和酮会发生反应。在无缓冲的水溶液中的氨基柱会产生强碱性，导致部分硅胶溶解。

如果使用了错误的溶剂，色谱柱也会塌陷。原因是色谱柱从根本上说是非常松散的结构。它们通过颗粒彼此的粘附而部分地保持在一起。当将其置于能够破坏这种粘附力的流动相中时，塌陷的可能性就会增加。这偶尔会发生在中等极性溶剂中的氰基柱或THF中的苯基柱。

另一个原因远离色谱柱“清洗”。 

小 结

导致色谱柱寿命短的原因，可能样品原因，物理损坏以及不合理的使用：

如果是样品原因可对样品进行预处理，或者使用预柱（首推），另外也可以清洗和反冲洗（不推荐）。

物理损坏是不可逆的，需要更换色谱柱。

不合理的使用包括超出pH使用范围，使用错误的溶剂，以及部分色谱柱只能用于特定项目。