7月2日，国家药品监督管理局、国家卫生健康委发布公告，正式颁布2020年版《中国药典》，新版药典将于今年12月30日起正式实施。新版《中国药典》中对非无菌产品的微生物限度及检查方法等都做出了相关要求，本文对其要点进行了整理，供大家参考。

平皿法

平皿法包括倾注法和涂布法。

除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

（1）培养和计数

1）除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。

2）菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。

3）点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。

4）若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

（2）菌数报告规则

1）需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。

2）取最高的平均菌落数，计算1g、1ml或10cm2供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。

3）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

薄膜过滤法

除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。

取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。

（1）培养和计数

培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

（2）菌数报告规则

以相当于1g、1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数(每张滤膜过滤1g、1ml或10cm2供试品)，或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

MPN法

取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30～35℃培养3～5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。

记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3查每1g、1ml或10cm2供试品中需氧菌总数的最可能数。

结果判断

（1）需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数(包括真菌菌落数)；霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数(包括细菌菌落数)。

（2）若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素(如氯霉素、庆大霉素)的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基(如玫瑰红钠琼脂培养基)进行霉菌和酵母菌总数测定。

（3）使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。若釆用MPN法，测定结果为需氧菌总数。

各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：

101cfu：可接受的最大菌数为20；

102cfu：可接受的最大菌数为200；

103cfu：可接受的最大菌数为2000，依此类推。

若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。