导读

质谱概念于1913年由Thomson提出，经过不断的发展，近年来以其高灵敏度、高准确性和多通道检测成为分析检测领域最核心的技术之一。它的原理是根据不同质荷比（m/z)的带电粒子在电磁场中运动行为的差异而进行识别和检测。在美国，质谱技术的发展相对成熟，服务于临床质谱检测的项目就已达400余项。国内质谱生物监测的发展也是如火如荼，目前主要扩展到了新生儿筛查、维生素检测、药物监测、微生物鉴定等领域。据统计，国内质谱生物检测市场已过百亿，LDT更有广阔市场有待开发。质谱的发展也有力推动了精准医疗的发展，也因此，质谱的热度逐年递增。

01、方法学验证相关内容

各国药品监管机构发布的指导原则以及ISO 17025的规范性文件中关于方法学验证的内容中，一般都会提到以下3个概念：方法验证（methodvalidation）、方法转移（methodtransfer）和方法确认（methodverification），三者既相互联系又有区别，都是为了保证检验方法适合于检验、被检样品质量可控，同时确保检验人员有能力操作方法。目前行业中方法验证的内容非常丰富，但是对方法转移的内容却很少提及，本篇文章将着重介绍下方法转移的相关内容。

02、何为生物分析方法转移？

一个实验室建立了分析方法并经过验证后、当其他实验室(方法接收实验室）在使用这个方法进行检验检测时，就牵涉到方法在2个不同实验室之间的转移问题，接收方法的实验室需要证明其能够成功地在本实验室中运行该方法，这就是所谓的方法转移。

03、生物分析方法转移面临的挑战

生物分析方法的转移过程存在一些挑战。这些挑战可能涉及方法本身，方法转移过程，实验室之间的沟通，以及实验室之间不同的工作习惯等。如果不做好充分准备，在生物分析方法转移过程中的一些疏忽可能会导致整个研究项目的延误。

04、生物分析方法转移的的准备

从实际操作的角度看，如果接收方法的CRO（接收方实验室）和发送单位（发送方实验室）是初次合作，那么在签订合同之前就应该对CRO的设施和整个实验室的资质进行审查，同时进行其他常规的程序（包括法律层面的）。发起单位的质量保证（QA）和生物分析部门都应该参与审查工作，以判断CRO的整体合格性，尤其是涉及CRO对GxP监管标准[良好实验室规范（GLP）、良好临床试验规范（GCP）等]的合规程度及其科学业务能力。对于那些已经和发起单位合作过的CRO，也需定期审查其设施和实验室的合格性。

05、生物分析方法的转移

①交流与沟通的重要性

一个生物分析方法的转移可以被视作不同分析人员使用不同的实验室系统（电脑系统、软件、冷藏室、天平、移液枪、溶剂、自动化系统、质量检测系统等）在不同的仪器上进行的交叉验证。就步骤而言，一个实验室一旦被选为接收方法的实验室，发送和接收方实验室的科学人员应当讨论方法的所有细节，尤其是方法的专属性和分析物的稳定性。需要强调的是，漏过任何书面方法步骤中没被提及的微小细节都有可能导致方法转移的失败，尤其是对于那些有难度的方法。在可能的情况下，应当为方法转移进行面对面的会议或者实地培训。一个成功的方法转移不仅在于发送方和接收方实验室的科学能力，而且还取决于他们之间的良好沟通。理解方法转移的共同目标及尊重实验室之间文化的不同会帮助两个实验室建立稳固的联系，从而使方法转移得以顺利进行。

②验收内容及标准

根据将要转移方法所服务的项目性质，生物分析方法的转移可以是简单的部分或交叉验证，但也可能是“按需定制”的原则进行进行复杂的全面验证。

对已知分析物含量的QC样品进行重复分析，用来确定方法的准确度。批内（交叉/全面验证）准确度应当用至少4个浓度水平（LLOQ、低、中、高） 的6次重复测定来进行测试。为了便于理解，这里给大家介绍下该四个浓度如何选择：

①LLOQ：

LLOQ即为定量下限，一般为标准品经空白基质逐级稀释、前处理，并质谱检测后，其信噪比S/N为10时，6次平行测定后不精密度 CV<20%，准确度<15%。

②低浓度质控：

可选110% LLOQ的质控浓度作为低浓度质控浓度，也有指南中建议选定临界值的1/2。

③中浓度质控：

可选[定量下限（LLOQ）+标曲的最高点浓度] /2的质控浓度作为中浓度质控浓度，也有指南中建议选定临界值的2倍。

④高浓度质控：

可选90%或80%标曲的最高点浓度。

除LLOQ的偏差（%） 应当在土20%范围内， 其余QC样品浓度水平测得的平均偏差应该在标示浓度的±15%内。对于批间（全面验证）准确度，来自于至少两天的至少三批次分析的LLOQ、低、中、高浓度样品应当被测试。除LLOQ样品的偏差应该在标示浓度的±20%内，对所有其他QC样品，平均浓度应该在标示值的±15%内。

批内（交叉/全面验证）精密度应当用至少4个浓度水平（如LLOQ、低、中、高） 的6次重复测定来进行测试。除LLOQ浓度样品的变异系数（CV） 不应超过20%， 其余浓度水平QC样品的CV不应超过15%。对于批间（全面验证）精密度，来自于至少两天的至少三批次分析的LLOQ、低、中、高QC浓度样品应被测试。除LLOQ浓度样品的CV不应超过20%，所有QC样品的批间CV不应该超过15%。

除以上在接收方实验室进行的使用接收方实验室制备的QC样品进行的批内（交叉/全面验证）及批间（全面验证）实验外，一组由发送方实验室制备并且验证过的QC样品（低、中、高）应当被安排在接收方实验室的至少一个验证实验中，并且至少每个浓度水平重复一次。对所有被测试的浓度水平而言，这些QC样品在发送方和接收方测得结果的差异应当在±15%以内。

作为方法转移的一部分，至少20个已测样品应在接收方实验室重新分析。对于至少67%的已测样品，在发送方实验室的原分析中得到的浓度数据和在接收方实验室重新分析中得到的浓度数据应在两者平均值的±20%内。两组结果之间较大的差别可能暗示分析方法存在问题并应当进行调查。