摘要  目的：建立HPLC法测定不同厂家不同制备工艺的氯雷他定口崩片的有关物质及含量。方法：采用ZORBAXEclipse plus-C18 (4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾2.28g，加水800mL使溶解，用磷酸调节pH值至6.0，再加水至1000mL）-甲醇（20:80）为流动相；流速为1.0mL·min-1；检测波长为247nm；进样量20µL。结果：氯雷他定峰与其他杂质峰均可达到完全分离，检测限为39.2μg·g-1；氯雷他定浓度为0.4096～1024μg·mL-1范围内线性关系良好（r=1.0000）；平均回收率为99.9%，RSD为0.7%（n=9）；3根不同型号的色谱柱在3台不同型号的高效液相色谱仪上测定7批样品，含量测定结果分别为99.1%（RSD=0.5%）, 95.7%（RSD=0.4%）, 99.7%（RSD=0.4%）,102.4%（RSD=0.5%）, 101.0%（RSD=0.7%）, 99.9%（RSD=0.6%）, 101.0%（RSD=0.7%）。结论：建立的方法灵敏度高、专属性强、简便快捷、适用性广，可用于不同制备工艺的氯雷他定口崩片的有关物质检查及含量测定。

 

关键词：氯雷他定口崩片；高效液相测定法；有关物质；含量测定；质量控制

 

中图分类号：921.2  文献标识码：A  文章编号：1009-3656（2019）

 

氯雷他定为抗组胺类药，用于治疗季节性过敏性鼻炎及特发性荨麻疹，还可用于治疗慢性荨麻疹等[1]。口崩片是指在口腔内不需要用水即能迅速崩解或溶解的片剂，一般适合于小剂量原料药物，常用于吞咽困难或不配合服药的患者。可采用直接压片法和冷冻干燥法制备[2]。由于口崩片有两种不同的制备工艺，多数品种都没有统一的质量标准，不同厂家使用不同的企业标准，《中华人民共和国药典》2015年版首次收载口崩片质量标准且品种仅有2个，因此，口崩片的质量标准亟待统一和提高。经查阅文献，报道较多的是氯雷他定原料药及片剂[3-5]，氯雷他定口崩片的报道较少[6-7]，由于氯雷他定口崩片不同的制备工艺，各企业分别使用不同的国家注册标准，没有统一的质量标准，仅有一篇文献对氯雷他定口崩片的质量标准进行研究[8]，但制备工艺为直接压片法。未查阅到关于冷冻干燥法制备的氯雷他定口崩片的质量标准相关研究。冷冻干燥法的工艺是将配制好的药液灌注在成型的泡罩中，灌注药液的泡罩随传送带通过液氮隧道迅速冷冻成型，与传统的直接压片法制备工艺不同，性状也与普通片剂不同，为疏松的不规则圆形片。本实验收集了三个厂家包含了两种制备工艺的氯雷他定口崩片进行研究，建立了可用于不同制备工艺的氯雷他定口崩片的有关物质检查及含量测定的HPLC法，为统一该品种的质量标准提供参考。

 

1、 仪器与试剂

 

1.1 仪器

 

Thermo Scientific U3000 液相色谱仪，配备DAD检测器；Mettler Toledo XS205DU 电子天平；梅特勒-托利多S40酸度计；Millipore 超纯水仪；

 

1.2试药

 

氯雷他定对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100615-201404 纯度：100.0%）、氯雷他定口崩片（规格为10mg）（由三个不同厂家提供。批号1807023、1807024、1807025为冷冻干燥法制备工艺；批号180802、171003、180602、180603为直接压片法制备工艺）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。

 

2、 方法与结果

 

2.1色谱条件

 

色谱柱：ZORBAXEclipse plus-C18 (4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾2.28g，加水800mL使溶解，用磷酸调节pH值至6.0，再加水至1000mL）-甲醇（20:80）；流速1.0mL·min-1 ；检测波长247nm；进样量20µ0。

 

2.2溶液的制备

 

2.2.1含量测定用溶液  取本品10片，分别置50mL量瓶中，加水2mL分散崩解后，加流动相40mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，以每12000r·min-1率离心5min，取上清液，作为供试品溶液；取氯雷他定对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含氯雷他定0.2mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

 

2.2.2有关物质检查用溶液  取本品5片，置200mL量瓶中，加水10mL分散崩解后，加流动相160mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，以12000 r·min-1速率离心5min，取上清液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为有关物质对照溶液；精密量取对照溶液1mL，置20mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。

 

2.3系统适用性试验

 

    取“2.2.2”项下的有关物质供试品溶液20µ0，按“2.1”项下色谱条件进行测定，氯雷他定峰与相邻杂质峰的分离度良好，见图1。

t/min

图1 系统适用性色谱图

 

2.4专属性试验

 

取批号180602的氯雷他定口崩片5份（每份各5片），分别置200mL量瓶中。（1）酸破坏：加入1mol·L-1的盐酸溶液10mL，放置5h，加入1 mol·L-1的氢氧化钠溶液10mL，加流动相150mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，离心5min（12000 r·min-1），取上清液；（2）碱破坏：加水5mL分散崩解后（样品在1mol·L-1的氢氧化钠中不分散崩解），加入1 mol·L-1的氢氧化钠溶液5mL，放置5h，加入1 mol·L-1的盐酸溶液5mL，加流动相150mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，离心5min（12000 r·min-1），取上清液；（3）光照破坏：加水10mL分散崩解后，紫外光照射5h，加流动相150mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，离心5min（12000 r·min-1），取上清液；（4）热破坏：加水10mL分散崩解后，80℃加热5h，放冷，加流动相150mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，离心5min（12000 r·min-1），取上清液；（5）氧化破坏：加水8mL，再加入过氧化氢溶液（15%）2mL，放置5h，加流动相150mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，离心5min（12000 r·min-1），取上清液。取上述溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，结果见图2。实验表明，氯雷他定峰与其相邻杂质峰均能达到完全分离，方法的专属性良好。

 

酸破坏（destroyed by acid）

A/mAU

t/min

 

 

 

碱破坏（destroyed by aklaline）

A/mAU

光照破坏（destroyed by light）

A/mAU

  t/min                                     

 

热破坏（destroyed by high temperature）

A/mAU

 t/min                                      

 

氧化破坏（destroyed by oxidation）

A/mAU

t/min

 

图2 专属性试验色谱图

2.5线性范围

 

精密称取氯雷他定对照品0.2048g，置20mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为氯雷他定线性储备液；精密量取线性储备液适量，用流动相稀释成含氯雷他定的浓度为0.4096，2.048，20.48，204.8，1024μ02mL-1的系列浓度溶液。按照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，以浓度（X，μg·mL-1）为横坐标，进行线性回归，线性方程为:

 

Y=0.3857X-0.4273 r=1.000 0

 

结果表明，氯雷他定在0.4096～1024μg/mL-1的浓度范围内，线性关系良好。

 

2.6精密度试验

 

    取“2.2.1”项下的对照品溶液按照“2.1”项下的色谱条件连续进样6次，记录氯雷他定峰面积，RSD为0.3%（n=6），表明仪器精密度良好。

 

2.7重复性试验

 

    取批号180602的氯雷他定口崩片1片（6×10份），分别置50mL量瓶中，加水2mL分散后，加流动相40mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，测定结果的RSD为0.8%，表明方法重复性良好。

 

2.8稳定性试验

 

取氯雷他定对照品和三个厂家的样品，按照“2.2.1”项下方法配制对照品溶液和供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，在室温放置0、1、3、5、8、12、16、20、24h后峰面积的变化，计算RSD值，对照品溶液主峰面积的RSD值为0.5%，三个厂家的供试品溶液主峰面积的RSD分别为0.5%、0.6%和0.6%，结果表明对照品溶液和供试品溶液24h内稳定。

 

2.9回收率试验

 

取氯雷他定对照品约100mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为加标对照品溶液；取三个厂家批号分别为1807023、180802和180602样品各1片（9份），分别置于100mL量瓶中，加水4mL分散后，各分别加入加标对照品8、10和12mL，各3份，加流动相70mL，超声10min使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，以12000r·min-1速率离心5min，取上清液。按照“2.1”项下色谱条件进行测定，以外标法计算平均回收率，上述三个厂家的平均回收率分别为99.8%（RSD=0.8%）、99.9（RSD=0.6%）和99.3（RSD=0.8%）。

 

2.10检测限与定量限

 

    精密量取“2.2.1”项下的对照品适量，用流动相逐级稀释成系列浓度，按照“2.1”项下的色谱条件测定，记录色谱图。以信噪比S/N=3:1计算检测限，以信噪比S/N=10:1计算定量限。检测限为0.02μg·mL-1，定量限为0.05μg·mL-1。

 

2.11耐用性

 

2.11.1色谱条件耐用性  取“2.2.2”项下的供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，分别考察了流动相比例，流速，柱温，缓冲液pH值变化，氯雷他定峰的理论板数均符合规定，氯雷他定峰与相邻杂质峰的分离度均符合规定。

 

2.11.2色谱柱及仪器耐用性  取“2.2”项下的各溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，选用3根不同型号的色谱柱在3台不同型号的高效液相色谱仪上测定7批样品，含量测定结果及有关物质检查结果见表1，结果基本一致，方法耐用性良好。

 

表1 样品测定结果

		含量测定		有关物质
厂家	批号	仪器	含量/%	A+2.2S	单杂/%	总杂/%
1	1807023	1	98.7	4.7	0.04	0.04
		2	99.2	2.3	0.06	0.06
		3	99.6	2.1	0.04	0.05
	1807024	1	95.2	10	0.04	0.04
		2	95.8	9.7	0.06	0.06
		3	96	9.4	0.04	0.04
	1807025	1	99.4	5.1	0.06	0.06
		2	99.5	4.1	0.09	0.09
		3	100.1	4	0.07	0.07
2	180802	1	101.9	5.1	0.23	0.38
		2	102.6	7.4	0.28	0.35
		3	102.8	7.7	0.23	0.34
3	171003	1	101.7	5.3	0.13	0.26
		2	100.4	3.6	0.19	0.27
		3	100.8	3.9	0.15	0.25
	180602	1	100.6	8.6	0.18	0.27
		2	99.5	8.2	0.22	0.29
		3	99.7	8.3	0.17	0.27
	180603	1	101.6	8.8	0.19	0.25
		2	100.3	7.8	0.23	0.3
		3	101.1	8.9	0.2	0.26

 

注：

1:Waters 2695（Kromasil100-5C18）(4.6 mm×250 mm，5μm）（pH1.5-9.5）

2：Agilent 1260(ZORBAX Eclipse plus-C18 (4.6mm×250 mm，5μm）（pH2-9）

3：戴安U3000（X Bridge C18）(4.6mm×250 mm，5μm）（pH1-12）

 

2.12样品的测定

 

2.12.1含量测定   精密量取“2.2.1”项下的供试品溶液和对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算每片含量，并求得10片的平均含量。结果见表1

 

2.12.2有关物质检查  精密量取“2.2.2”项下的供试品溶液和对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，除辅料峰外，计算单个杂质和总杂质，结果见表1。

 

3 、讨论

 

3.1供试品溶液的配制

 

由于口崩片有直接压片和冷冻干燥两种制备工艺，实验过程中发现，直接压片法制备的氯雷他定口崩片在流动相中可分散，冷冻干燥法制备的氯雷他定口崩片在流动相中不可分散，在水中迅速分散，为使供试品溶液的配制方法适用于两种制备工艺的提取，需先加少量的水进行分散后再进行提取，此方法同时适用于其他品种的口崩片。

 

3.2含量测定方法的选择

 

口崩片一般适用于小剂量原料药物，一般需要进行含量均匀度考察，同时，冷冻干燥法制备的口崩片的性状不同于压片法制备的口崩片，无法研成粉末，因此一般的称取粉末后提取的方法不适用于冷冻干燥法制备的口崩片，无法同时适用于两种制备工艺的口崩片的含量测定。本实验采取1片（10份）先加少量水分散后提取，计算每片的含量，并求得10片的平均含量作为含量测定结果，同时以每片的含量计算含量均匀度。此方法适用性广，经济简便，可同时为其他品种的口崩片提供参考。

 

3.3 小结

 

本方法灵敏度高、专属性强、简便快捷、适用性广，可用于直接压片法和冷冻干燥法制备的氯雷他定口崩片的有关物质检查和含量测定，可作为本品种的质量控制方法。

 

参考文献

[1] 马坚池，卢秀仪，唐增奇. 氯雷他定质量慢性荨麻疹的有效性分析与评定[J]. 现代诊断与治疗，2017，28（14）：2567

[2]中华人民共和国药典2015年版. 四部[S]. 2015:3

[3] 唐立超，郭伟斌，郑淑凤，等. HPLC测定氯雷他定的含量及其有关物质[J].中国现代应用药学，2014,31（8）：994

[4] 康军，张鹤. HPLC法测定氯雷他定片的含量[J].中国医药导报，2011,8（4）：56

[5] 崔京，黄健，霍立茹，等. 氯雷他定片含量及有关物质的HPLC测定[J]. 中国医药工业杂志，2002,33（6）：294

[6] 官清，廉江平，扈本荃，等. 氯雷他定口崩片的人体生物等效性研究[J]. 西北药学杂志，2012,27（5）:461

[7] 刘文玲，王学应，黄桂华. 氯雷他定口崩片的制备及初步稳定性考察[J]. 齐鲁药事，2010,29（2）：108

[8] 李寅，林岱，孙数周，等. 氯雷他定口崩片的质量标准研究[J]. 现代食品与药品杂志，2007,17（4）：68