硒是动物体内必需的微量营养元素之一，在抗氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶的形成过程中起着重要作用，具有防癌、抗癌、抗氧化等多种生理功能。硒摄入不足会导致肝坏死，肌肉营养不良，可能引发克山病、大骨节病、癌症、心脏病等多种疾病。无机硒的生物利用率差、毒性大；而有机硒安全性高、更易于被人体吸收利用。由于硒的生物利用性、毒性与其存在形态有着密切的关系，因此对硒的存在形态及含量进行分析尤为重要。

成都市疾病预防控制中心张蜀等采用加氧双四级杆模式，采用Zorbax SB–Aq反相色谱柱，用pH值分别为2.7、7.0的10 mmol／L柠檬酸溶液（含5 mmol／L己烷磺酸钠）进行梯度洗脱，建立高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱法测定水样中硒酸盐、亚硒酸盐、硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸6种硒形态的检测方法。

●主要仪器与试剂 ●

      超纯水系统：Milli-Q Advantage型，默克密理博（中国）有限公司。

      高纯氩：体积分数为99.999%，成都世茂气体有限公司。

      pH计：510型，美国优特公司。

     柠檬酸：质量分数不低于99.5%，CAS号为77–92–9，西格玛奥德里奇（中国）有限公司。

     己烷磺酸钠：质量分数不低于98%，CAS号为2832–45–3，西格玛奥德里奇（中国）有限公司。

      氨水：质量分数为20%~22%，A512–P500，赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

      硒酸盐、亚硒酸盐、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸溶液标准物质：SeO42–、SeO32–、SeCys2、MeSeCys、SeMet的质量摩尔浓度分别为0.525、0.543、0.560、0.433、0.499 μmol／g，编号分别为GBW 10033、GBW 10032、GBW 10087、GBW 10088、GBW 10034，中国计量科学研究院。

     硒代乙硫氨酸标准品：CAS号为2578–27–0，质量分数为98%，加拿大TRC公司。

     普通饮用水样品：乐百氏桶装饮用水，乐百氏饮用水有限公司。

     富硒矿泉水样品：稀世宝饮用天然矿泉水，恩施硒之泉矿泉水有限公司。

     实验用水为超纯水。

●仪器工作条件 ●

1　色谱

      色谱柱：Zorbax SB–Aq型反相色谱柱[150 mm×4.6 mm，5 μm，安捷伦科技（中国）有限公司]；柱温：25 ℃；流动相：1%甲醇–pH值分别为2.7、7.0的10 mmol／L柠檬酸溶液（含5 mmol／L己烷磺酸钠）；洗脱方式：梯度洗脱，洗脱条件见表1；进样体积：10 μL；流量：1 mL／min。

2　质谱

     射频功率：1 550 W；玻璃同心雾化器；采样深度：8.0 mm；蠕动泵转速：0.3 r／s；载气：高纯氩气，流量为0.90 L／min；补偿气：高纯氩气，流量为0.25 L／min；雾化室温度：2 ℃；积分时间：0.5 s；采集时间：10 min；反应气：氧气，流量为25%；采集质量数：双重四级杆Q1、Q2质量数分别为80、96。

●样品处理 ●

      水样及加标样品经孔径为0.22 μm的聚四氟乙烯滤头过滤后测定。

●测定结果 ●

      6种形态硒的质量浓度在1～100 ng／mL范围内与响应强度有良好的线性关系，相关系数均大于0.999，检出限为0.097 2~0.166 0 ng／mL。测定结果的相对标准偏差为5.65%~7.13%(n=7)，样品加标回收率为74.6%~97.5%。