柱色谱是天然药化实验中必不可少的分离手段，小编将结合教研室师兄的多年经验，对柱色谱及相关知识进行简单的介绍和经验总结，本期内容是硅胶柱色谱和凝胶色谱柱。

硅胶色谱柱

相信做过天然药化实验的同学们肯定对硅胶柱都有一些印象，硅胶柱色谱的原理是在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物理和化学作用两种，物理作用来自于硅胶表面与溶质分子之间的范德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。所有层析法所依据的工作原理都是凭借于待分离的几种物质在将它们进行分配的两相之间的溶解度或者吸附能力上的差别。

大家都知道硅胶柱使用的几个步骤：拌样、装柱、上样、梯度洗脱、点板、合并，但同样的步骤，得到的分离效果却不一定一样，以下列出了几点需要注意的地方。

1、明确目的
提取得到的浸膏成分十分复杂，因此第一次过硅胶柱的主要目的就是粗分和划段，并不是直接分得单体化合物。

2、硅胶柱的选择
明确了过硅胶柱的目的，在硅胶柱的选择上就很好解释了。细长的柱子虽然能使样品有足够的时间和空间展开，但也导致扩散和交叉，因此师兄建议使用尽量短和粗一些的柱子。

3、装柱硅胶用量
使用200-300目的硅胶，装柱高度大约为样品高度的5-8倍。

4、装柱的技巧
装柱分为湿法和干法两种，在这里师兄的建议是使用湿法装柱，特别是对于初学者来说，湿法装柱的好处就是可以使硅胶紧实、平整、均匀。当然，为了不产生气泡，在装柱时一定要注意搅拌，用溶剂充分浸泡。

5、样品的处理
拌样时使用的硅胶可以比装柱硅胶粗一些，100-200目甚至80-100目都可以，用量大约1:1，取决于样品的状态。

6、上样的技巧
为了不对柱床造成冲击，上样时选择干法上样。上样后在样品层上再加上脱脂棉和保护硅胶，以减小加液时溶剂对样品层的冲击所带来的化合物交叉。

7、溶剂系统的选择
溶剂系统一般为两相，选择上很灵活，其实只要两相互溶，分离效果好，就是合适的系统。在这里师兄推荐给大家两种系统：石油醚：乙酸乙酯；二氯甲烷：甲醇。大家可以根据样品的极性来选择合适的溶剂。

8、洗脱条件
由于过柱的目的是粗分和划段，因此在洗脱时按极性从小到大每个梯度冲洗3～5个柱体积即可。

9、点板
点板尽量选择在过柱子的时候，一边过柱子一边点板，这样可以根据实际情况判断和选择更换的梯度和合适的更换时间。

10、合并
合并并不是只要稍有不一样就要分成两个部分，这样不仅会造成含量少的化合物被分散，同时也为后期实验带来很大的工作量，要把握好合并的度。

以上几点就是在过硅胶柱时需要格外注意的几点，但是在这里需要提醒大家的是，分离的效果主要还是取决于待分离的浸膏是否适合此种分离方法，所以在进行实验之前，一定要仔细阅读相关文献，多多总结前人的经验，找到一种适合的方法和技巧再开始做，这样才能达到事半功倍的效果。

凝胶色谱柱

以凝胶为固定相的色谱，称为凝胶色谱。葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝胶粒子，在其交联键的骨架中有许多一定大小的网眼。网眼小，只有小分子的物质网眼小，只有小分子物质才能进入网眼;而超过一定限度的大分子物质，就被排阻在凝胶粒子的外部而不能进入网眼。这就使得能进入凝胶内部与不能进入凝胶内部的分子，如同按照分子大小过筛一样，所以称为分子筛。大分子化合物阻力小，行动快，先流出。小分子化合物阻力大，行动慢，后流出。

了解了凝胶的原理我们就可以看出，其与硅胶的分离原理完全不同，因此才有可能把前面硅胶按照极性分离的划好段的样品分离开。而凝胶柱在使用上与硅胶柱也不太一样。

1、明确主要目的
经过第一根凝胶下来的样品，虽然划分成了几段或者十几段，但对于一个组分依然有很多的化合物，因此过凝胶柱的主要目的依然是粗分，由于凝胶柱使用上的特殊性，有些时候也能达到精分的效果，甚至可以直接拿到结晶。

2、凝胶使用前的处理及装柱要点
凝胶是可以重复使用的，和硅胶相比使用更方便，装一次就可以一直使用。需要注意的是，凝胶在湿法装柱之前需要用溶剂充分溶胀，再分次装进玻璃柱中，等其自然沉降完全、紧实后才可使用。

3、凝胶柱的选择
一般选择细长的玻璃柱，如果样品量大、复杂，只能粗分，也可以选择短粗型的柱子。

4、溶剂系统的选择
最常用的两种溶剂系统是纯甲醇系统和二氯甲烷：甲醇系统。

5、样品的处理
用最少量的溶剂溶解样品（一定要完全溶解）以减少样品层厚度，上样前过滤（0.45 µm）。

6、上样的要点
基本原则是减少样品层厚度，保证样品层的平整。

7、洗脱条件
一般选择等度洗脱，流速尽量慢一些，根据样品情况调整。
以上就是本期柱色谱相关知识和经验总结的全部内容啦，在这里要谢谢师兄提供的宝贵经验，同时也要提醒大家，经验固然重要，但也要结合实际来使用。