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嘉峪检测网 2021-08-15 23:05
在新版 2020 年版药典中， UHPLC 方法正式引入药典、得到药典认可。与 HPLC 方法相比，UHPLC 方法分析速度更快、运行成本更低、检测结果更准确。
液相色谱具有强大的分离、定量能力，是制药行业最为重要的分析检测手段之一。然而，2010年版《中国药典》之前的药物分析方法基本都是HPLC方法，存在时间长、效率低的缺点。通常分析一个化药品种至少需要半个小时，而中药的分离时间往往超过一个小时。
2020年《中国药典》中色谱柱范围扩大，可以使用一些粒径更小、内径更细的色谱柱。这主要集中在高效液相色谱上，这些色谱柱可以产生更大的压力，使制药行业实验人员可以得到更高的分离效率和分析效果。
这也就官宣 UHPLC 方法正式引入药典、得到药典认可。与 HPLC 方法相比，UHPLC 方法分析速度更快、运行成本更低、检测结果更准确。
UHPLC 是以亚二微米小颗粒、超高柱效的填料为核心的技术。根据范德米特曲线，更小的填料颗粒具有更高的柱效、更快的最佳线速度以及更宽的最佳流速范围。因此，使用小颗粒的色谱柱，可以得到更高质量的数据结果，并且可以通过提高流速来加快分析速度，而不会造成柱效的降低。另外，UHPLC 节省化学试剂的同时还减少了废液处理量，大大降低了实验室的运营成本。
超高效液相的理论基础
那么，2020版《中华人民共和国药典》四部HPLC与2015版《中华人民共和国药典》四部HPLC有那些变化：
说明：
2015：表示2015版药典的删除或修改内容
2020：表示2020版药典新增内容
2020版药典四部0512
1. 对仪器的一般要求和色谱条件
1.1色谱柱
色谱柱内径一般为3.92.1-4.6mm,
填充剂粒径为32-lOμm
超高效液相色谱是适应小粒径约（2μm）填充剂的耐超髙压、小进样量、低死体积积、高灵敏度检测的高效液相色谱 。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果，可适提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相 PH 值一般应在2-8之间。烷基硅烷带有立体侧链保护，或残余硅羟基巳 封闭的硅胶、聚合物复硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛PH值的流动相，可适合于PH值小2或大于8的流动相。
1.2检测器
“电雾式检测器”
1.3流动相
品种正文文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分~在该品种正文项 下注明。”
增加“流动相的洗脱方式”
1.4色谱参数调整
2. 系统适用性试验
2.1色谱柱的理论数（n）
2.2分离度（R）
2.3灵敏度
建立方法时，可通过测定一系列不同度的供试品或对照品 溶液测定噪比。
2.4拖尾因子（T）
沿与此平行线交点的距离（如图）。见下图。
2.5重复性
用于评价色谱系统连续进样时响应值的重 复性能。采用外标法时除另有规定外，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值（或内标值或其矫正因子）的相对标准偏应不大于2.0%;采用内标法时，通常配制相80%、100%和120%的对照品视进样溶液，加人规定量的内标溶液，配成3种不同度的溶液，分至少进样2次，计算平均因子，其的浓度和/或体积、色谱峰响应和分析方法所能达到的精度水平等，对相对标准偏差应不2.0%的要求可适当放宽或收紧，放宽或收紧的范围
以满足品种项下检测需要的精密度要求为准。
3. 测定法
3.1定性分析 全部为新增内容
3.1.1利用保留时间定性 新增内容
3.1.2利用光谱相似度定性 新增内容
3.1.3利用质谱检测器提供的质谱信息定性 新增内容
3.2定量分析
3.2.1内标法
3.2.2外标法
3.2.3加校正因子的主成分自身对照法
3.2.4不加校正因子的主成分自身对照法
3.2.5面积归一化法法
增加“如适用，也可使用其他方法如标准曲线法等，并在品种正文项下注明。”
4.多维液相色谱
“多维液相色谱技术”
从以上对比可以看出：
2020版药典四部HPLC与2015版药典四部HPLC调整力度之大，前所未有。
1、色谱柱内径、充剂粒径发生了改变，色谱柱内径由3.9-4.6mm调整为2.1-4.6mm，充剂粒径由3-l0μm为2-10μm；
2、色谱柱新增烷基硅烷带有立体侧链保护柱,这些改变扩大了色谱柱的选择范围，从事HPLC操作的都知道，色谱柱的类型决定了色谱柱的性质，色谱柱的的长度、粒径影响分析时间分析效率；
3、在分析具体品种时，保留时间、溶质之间的分离情况、出峰顺序等色谱柱的保留行为都可能出现较大的差异，根据当前技术水平调整色谱柱的内径范围及填充剂的粒径范围更有利于提高样品的色谱分析质量。
对仪器的一般要求和色谱条件
1、增加“色谱参数调整”大段内容；
2、对固定相、填充剂粒径柱长、流速、进样体积、梯度洗脱程序、流动相比例、流动相缓冲盐浓度、柱温、PH值从等度洗脱和梯度洗脱两个方面规定了参数调整范围，但检测波长不可调整；
3、样品分析如进行色谱参数调整，系统适用性应符合要求；
4、应评估色谱参数调整对分离度和检测结果的影响程度，根据评估结果对调整色谱参数后的方法进行确认；
5、如调整超出2020版药典四部HPLC中规定的范围，调整的方法应进行方法学验证达到可接受水平后方可用于产品的检验。
检测器增加“电雾式检测器”
液相检测器分为选择性检测器与通用检测器，电雾检测器是十几年来出现的一种新型的检测器，灵敏度高、检测极限低，具有兼容性、重现性好的特点，将“电雾式检测器”纳入2020版药典四部HPLC符合检测器当前技术发展趋势。
其他变化
1、流动相增加了“增加“流动相的洗脱方式”，包括等度洗脱、梯度洗脱其他变化。
2、定量分析前新添加了“定性分析方法”如利用保留时间定性、利用光谱相似度定性、利用质谱检测器提供的质谱信息定性。利用保留时间定性，该方法2015版药典对于具体品种进行鉴别时应用了该方法，只是未列入HPLC内容，这次列入到HPLC通则。
3、一种新型分离技术“多维液相色谱”列入2020版药典四部HPLC定量分析，对于复杂性样品分析的相对于现在使用一维色谱的，拓宽了样品的分离空间，提高了HPLC系统的分离能力。
2020版药典四部HPLC与2015版药典四部HPLC调整力度大,反映了当前国内HPLC检测技术发展现状又与国际检测技术更加协调。
1. 对仪器的一般要求和色谱条件
1.1色谱柱
色谱柱内径一般为3.92.1-4.6mm,
填充剂粒径为32-lOμm
超高效液相色谱是适应小粒径约（2μm）填充剂的耐超髙压、小进样量、低死体积积、高灵敏度检测的高效液相色谱 。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果，可适提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
来源：Internet
