检测限和定量限是分析方法的重要属性，在中国药典2020年版分析方法验证指导原则中规定这2项是重要的验证指标，包括定量、限度的杂质测定需要着重考虑检测限和定量限，且在该版本指导原则中删除了校正因子以及其中定量限的规定。本文试图从定义、测量方法、常见问题和解决方案进行简单的讨论，为分析方法验证活动中检测限和定量限的的开展提供一定的参考。

1、检测限和定量限的定义

     检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量，定量限系指试样中被测物能被定量测定的最低量。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。而对微量或痕量药物分析、定量测定药物杂质和降解产物时，应确定方法的定量限，需要注意的是定量限的测定结果应符合准确度和精密度要求。

2、一般规定及要求

      检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。药品的鉴别试验和杂质检査方法，均应通过测试确定方法的检测限。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。常用的方法如下。

直观法

      用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

信噪比法

      用于能显示基线噪声的分析方法，即把巳知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的被测物质最低浓度或量。一般以信噪比为3 :1或2 : 1 时相应浓度或注人仪器的量确定检测限。

基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法

       按照L O D = 3 .3 δ /S公式计算。式中L O D :检测限；

δ：响应值的偏差；S : 标准曲线的斜率。

δ可以通过下列方法测得：①测定空白值的标准偏差；

②标准曲线的剩余标准偏差或截距的标准偏差来代替。

数据要求

      上述计算方法获得的检测限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果。

3、信噪比法具体怎么操作

      信噪比的规定1：一种使空白样与供试品，以空白样目标峰位置的信号为噪音（ASTM，此噪音为欧盟和美国认可的噪音参数）（注意agilent此时应该选择的噪声时间至少大于1min，waters建议为半峰宽的20倍），以供试品目标峰的峰高为信号。以此手工计算信噪比。这种方法是最符合药典要求，限制条件更高，更科学。

      信噪比的规定2：另一种是只用供试品，以供试品除目标峰之外选取基线平滑段为噪音，此法可直接读出信噪比（性能报告+噪音），但该法对选择的平滑段存在很大的随意性，如位置和时间长短（国内有些公司规定为0.2min）。此法虽然方便快速，而且基本能成功，但其实很大程度上存在数据拼凑的嫌疑。

      另关于噪音的选择时间USP为>=5倍半峰宽，EP、JP为>=20倍半峰宽。

     检测限：针对数据的要求问题，除了上述药典要求外。检测限应该对比的是同一个样品6针的平均信噪比（不得小于3）和保留时间（应不大于2.0%）（即药典虽然没有要求定量要求（准确度和精密度）），但应保证精密度）

     定量限：杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。3倍信噪比是检出限，10倍信噪比是定量限，除此之外，检出限表示方法能测出该物质时的最低浓度。定量限则表示方法能准确定量出该物质的最低浓度。

     具体来讲：

检测限：分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量；

定量限：分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。

检出限和定量限的区别在于：

检测限：

     检测限指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。

非仪器分析目视法：

    用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

信噪比法：

     用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠检测出的zui低浓度或量。一般以信噪比3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限也可采用标准差法：空白值＝0时；

①定背景10次以上，求出标准差σ。

②将σ乘以三倍；

③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X，即为方法的检出值；空白值不等于0；

定量限：

     指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。

    常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。

4、检测限和定量限的解决方案

      因为检测限和定量限常用测量方法的局限性，因此我们并不需要限定信噪比=3或10，而只需要验证方法的灵敏度符合要求。如通常检测限应低于限度的1/30，定量限应低于限度的1/10，但当达不到该要求时，只要规定定量限比ICH规定的杂质报告限低即可（如50%报告限）。

在检测限的验证中，可以通过加标的方法进行信噪比的确认，并可参考USP对于可检测性的定义和确认步骤：

-1：配置一个在限度浓度的杂质标准品溶液；

-2：配置一个添加了限度浓度的杂质标准品的样品标准品溶液；

-3：配置一个添加了（限度浓度100%-由Horwitz方程估算%RSD）的杂质标准品的样品标准品溶液；

如果1≤2且3＜2，则差异可以被检出；否则该方法不能胜任限度检测。

定量限可考虑设置一个低于限度数倍的低浓度样品（如5倍），在响应最差的仪器中信噪比仍然远大于10（如100），其回收率验证与精密度验证均符合规定，则可以认为该数字可以适用于今后的日常检测，如果检测结果小于该值，则直接报告“小于该值”即可[3]。如在采用荧光染色法测定外源性DNA残留量中，ChP规定DNA残留量在1.25～80ng/ml范围内，本法线性较好，因此供试品DNA残留量在该范围内可定量测定；当DNA残留量低于1.25ng/ml时应为限量测定，表示为小于1.25ng/ml。

      设计合理的定量下限对于方法的灵敏度有着很好的保证，在实际操作中只需要验证定量下限的准确度和精密度符合要求即可。如在复杂基质样品中，通常以标曲下限作为定量下限，且定量下限的准确度和精密度要求可适当放宽，要求校正标样回算的浓度一般应该在标示值的±15%以内，定量下限处应该在±20%内，质控样品准确度均值一般应在质控样品标示值的±15%之内，定量下限准确度应在标示值的±20%范围内。

     信噪比作为容易获得的参数，在检测限和定量限的测定中使用非常方便。主要需要考虑的是由于受仪器、色谱柱、试剂、泵系统、检测器等的影响很大，方法的灵敏度存在着很大的风险。因此，可以分析方法标准操作规程SOP中规定灵敏度溶液的信噪比作为检测有效的系统适用性标准，参见参考文献[3]提供的范例：以有关物质为例，如某组分的限度0.1%，方法验证时0.05%水平下信噪比20，回收率验证与精密度验证均符合规定，该水平为日常检测报告的最低值，则在系统适用性试验中应确认该组分0.05%水平下信噪比不小于20。