初始污染菌，即生物负载，是多种微生物污染源所产生的微生物的总和，这些微生物污染源包括原材料、部件的制造、组装过程、制造环境；组装/制造辅助手段（例如：压缩气体、水、润滑剂）、清洗过程和成品的包装。国家标准GB/T 19973.1和国际标准ISO 11737-1为初始污染菌/生物负载的检测提供了指导。

01、什么是初始污染菌？

初始污染菌，即生物负载，是指产品和/或无菌屏障系统上或其中的存活微生物的总数。

对于灭菌，初始污染菌可以为确定灭菌剂量提供依据；

对于细菌内毒素，初始污染菌可以为控制内毒素提供一定的参考；

对于生产过程控制，初始污染菌检测可以反映生产过程的控制水平。

02、如何进行初始污染菌检测？

（一）样品份额(SIP)的选择

可以用整个样品(SIP=1.0)或产品的部分(SIP＜1.0)进行生物负载测试；

已验证生物负载在产品上/内均匀分布，SIP可以是任何部分；

已验证生物负载在产品上/内非均匀分布，所选择的部分应能代表制备产品的每种材质，或可以从对灭菌工艺最有挑战的部分选择SIP；

未知生物负载的分布，所选择的部分应能代表制备产品的每种材质。

可依据产品的特性，例如：长度，质量，体积或表面积等计算SIP。

（二）样品量

对生物负载水平的常规监测通常使用3个~10个样品量。

样品量的合理选择需考虑以下因素：

检测到的生物负载的变化；

个别样品上可存活微生物估计数量的变化。

（三）初始污染菌方法验证

产品上的生物负载无法通过肉眼直接计数，因此需要将微生物洗脱后，对洗脱液中的微生物进行计数，以评估产品上的微生物数量。这里存在一个问题，即再优良的洗脱方法也无法保证将产品上的所有微生物全部洗脱，因此我们需要对洗脱方法的回收率进行评估，进而计算校正因子，使用校正因子对测试结果进行校正，使检测得到的生物负载尽可能地接近产品上实际的生物负载。这个过程就是我们所说的初始污染菌方法验证。初始污染菌方法验证包括重复性回收法和产品接种法两种。下面我们对两种方法进行比较。

（四）初始污染菌检测

确定了校正因子后，使用与方法验证相同的洗脱方法对产品进行洗脱，然后进行微生物回收和计数，回收菌落数与校正因子的乘积，即为测得的生物负载。常用的洗脱方法包括，袋蠕动、超声波洗脱、振摇(机械或手工方式)、涡旋混合、冲洗、搅切(碎裂)、擦拭，以及结合使用上述几种方法。常用的微生物回收方法包括平皿法(倾注法)、平皿法(涂布法)和薄膜过滤法。