摘要  目的：建立气相色谱法直接测定药用辅料油酸乙酯的脂肪酸组成。方法：采用聚乙二醇毛细管柱HP-INNOWAX（0.25 mm×30 m，25 μm），起始温度为178 ℃，维持2 min，以每分钟3.3℃的速率升温至240 ℃，维持2.5 min，进样口温度为250 ℃，检测器温度为270 ℃。结果：油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯和亚油酸乙酯能完全分离，线性关系好，均大于0.999 9，且方法重复性、灵敏度好。结论：使用该方法对供试品中油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯和亚油酸乙酯进行测定，可全面有效地控制药用辅料油酸乙酯的质量。

关键词：气相色谱法；直接测定；脂肪酸组成；油酸乙酯

Abstract  Objective： To develop a method for the direct determination of fatty acids composition in ethyl oleate by gas chromatography（GC）. Methods： The test was performed in capillary column coated with polyethylene glycol HP-INNOWAX （0.25 mm×30 m，25 μm）under the programmed temperature.  The programmed temperature of column was as follows：starting temperature as 178 ℃ for 2 min，then raising the temperature to 240 ℃ at a rate of 3.3 ℃·min-1，and maintaining it  for 2.5 min. The temperature of injection port was 250 ℃ and the detector temperature  was 270 ℃. Results：Ethyl oleate，ethyl palmitate， ethyl linoleate and ethyl stearate were separated completely by this method. There was good linearity with r>0.9999 for four ethyl fatty acids. The method had the good repeatability and sensitivity.Conclusion： It can control the quality  of pharmaceutical excipient of ethyloleate comprehensively and effectively to determine ethyl oleate，ethyl palmitate， ethyl linoleate and ethyl stearate with the established method.

Key words：  gas chromatography，direct determination， fatty acids composition， ethyl oleate

油酸乙酯系为脂肪酸乙酯的混合物，主要成分为油酸乙酯，可能混有棕榈酸乙酯和亚油酸乙酯等。本品主要用作溶剂、增塑剂、润滑剂和透皮促进剂，常用于制造注射剂、搽剂和软膏剂等。主要用于某些肌内注射剂的溶媒，是类固醇及其他亲脂性药物的适宜溶剂，性质与杏仁油、花生油类似，但黏性更小，可易于被身体组织快速吸收[1]。

目前《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）2015年版[2]收载的油酸乙酯的检测方法是甲酯化后进行气相检测的方法，需要在氮气流下进行碱酯交换，以免油酸的不饱和双键在反应过程中发生氧化而导致实验结果不准确，操作繁琐，且仅规定油酸（以油酸甲酯计）≥60.0%，对除主成分外的占比将近40%的组分没有进行控制。牛淑妍等[3]采用8%OV-210为固定液，ChromosorbW.AW.DMCS（60～80目）载体填充的玻璃柱，以邻苯二甲酸二丙酯为内标，通过气相色谱法测定油酸乙酯的含量。刘奕霏等[4]采用极性毛细管柱DB-FFAP（60 m×0.25 mm×0.25 μm），通过GC-MS方法测定白酒中棕榈酸乙酯、油酸乙酯及亚油酸乙酯的含量，赵婧子等[5]采用以聚乙二醇为固定液的DB-WAX毛细管柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）与氢火焰离子化检测器（FID），测定了辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的脂肪酸组成。本文建立的方法是以较为常规的聚乙二醇毛细管柱HP-INNOWAX（0.25 mm×30 m，25 μm）为色谱柱的气相色谱法，以较短的程序升温时间直接测定样品中脂肪酸组成，无需甲酯化前处理，除测定油酸乙酯含量外，还对供试品中棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯和亚油酸乙酯等进行测定，能够更好更全面有效地控制产品的质量。本文所建立的方法现已被收录于《中国药典》2020年版。

1  实验部分

1.1  仪器与试药

仪器：Agilent 6890N气相色谱仪；试剂：正己烷（色谱纯）；标准品：油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯（USP对照品）；样品为5家企业提供，共14批。

1.2  色谱条件

本实验采用Aglient HP-INNOWAX（0.25 mm×30 m，25 μm）毛细管色谱柱，进样口温度：250 ℃，检测器温度：270 ℃，起始温度为178 ℃，维持2 min，以3.3℃·min-1的速率升温至240 ℃，维持2.5 min，进样量：1 μL，分流比：30∶1，恒流模式：0.8 mL·min-1。结果按面积归一化法计算。

1.3  对照品溶液和供试品溶液制备

精密称取供试品适量，加正己烷溶解并定量稀释制成每1 mL中约含5 mg的溶液，作为供试品溶液；另精密称取油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯对照品各适量，加正己烷溶解并稀释制成每1 mL中分别约含5、1.2、1.2与0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。含量测定结果见表1，典型对照品溶液、空白溶液和供试品溶液色谱图分别见图1～3。

表1  含量测定结果（%）

Tab.1  The assay s results of samples

1. 棕榈酸乙酯（ethylpalmitate）  2. 硬脂酸乙酯（ethyl stearate）  3. 油酸乙酯（ethyl oleate）  4. 亚油酸乙酯（ethyl linoleate）

图1  典型对照品溶液色谱图

Fig.1  Typical chromatogram of the reference solution

1. 棕榈酸乙酯（ethyl palmitate）  2.硬脂酸乙酯（ethyl stearate）  3.油酸乙酯（ethyl oleate）  4.亚油酸乙酯（ethyl linoleate）

图3  典型供试品溶液色谱图（样1）

Fig.3  Typical chromatogram of the test solution （sample 1）

2  方法学验证

2.1  仪器精密度

取对照品溶液连续进样6次，考察仪器精密度，棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯和亚油酸乙酯峰面积RSD分别为1.0%、1.0%、1.0%和1.1%，且对照品溶液中各峰间的分离度均大于2.0。

2.2  重复性

取样8进行重复性试验（n＝6），棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯和亚油酸乙酯分别为5.3%、1.8%、79.0%和11.5%，RSD%分别为0.3%、1.8%、0.1%和0.2%。

2.3  线性与范围

取油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯对照品适量分别加正己烷制成系列浓度的标准曲线溶液，照“1.2”色谱条件进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作线性回归，油酸乙酯在0.5～20.0 mg·mL-1范围内线性方程为Y＝457.5X＋16.2；棕榈酸乙酯在0.06～2.5mg·mL-1范围内线性方程为Y＝435.1X＋4.8；硬脂酸乙酯在0.026～1.0mg·mL-1范围内线性方程为Y＝460.3X＋2.7；亚油酸乙酯在0.06～2.4mg·mL-1范围内线性方程为Y＝465.7X＋3.4；相关系数均大于0.999 9。

2.4  定量限和检出限

加正己烷逐一稀释得油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯对照品得定量限（S/N＝10）和检出限（S/N＝3）。测得油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯得定量限分别为24.5、25.9、25.2和23.9μg·mL-1，检出限分别为7.4、7.8、7.6和7.2 μg·mL-1。

2.5  溶液稳定性

每家企业各选取了1批样品考察了其样品溶液在2天内的稳定性，结果证明溶液稳定，详见表2。

表2  溶液稳定性结果（n＝2，%）

Tab.2  The test results of solution stability

方法学验证结果表明，该方法重复性较好，准确度和灵敏度高，且溶液较稳定，适用于直接测定油酸乙酯的脂肪酸含量测定。

3  结论

本文建立的气相色谱法同时直接测定药用辅料油酸乙酯中主成分油酸乙酯以及有关杂质棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯与亚油酸乙酯的含量，样品无需进行甲酯化前处理，减少了前处理过程中可能造成的成分损失或增加，分析方法更加快速简单，且灵敏度高，重复性好，适用于油酸乙酯的质量控制。

参考文献

[1] RAYMOND CR， PAUL JS， SIAN CO. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Fourth Edition. [M]. London， Chicago：Pharmaceutical Press， 2003

[2] 中华人民共和国药典2015年版.四部[S].  2015：472

ChP 2015. Vol Ⅳ[S].  2015：472

[3] 牛淑妍，张前前，许良忠，等.油酸乙酯的气相色谱分析[J]. 青岛化工学院学报：自然科学版， 2002，23(2)：51

NIU SY， ZHANG QQ， XU LZ， et al. Analysis of ethyl oleate by gas chromatography[J]. J Qingdao Institute Chem Technol（Nat Ed）， 2002，23(2)：51

[4] 刘奕霏，廉哲，梁鲁宁，等. GC-MS测定白酒中棕榈酸乙酯、油酸乙酯及亚油酸乙酯[J]. 刑事技术， 2016，41(2)：111

LIU YF， LIAN Z， LIANG LN， et al. Determination of ethyloleate and ethyl linoleate in liquor by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Forensic Sci Technol，2016， 41(2)：111

[5] 赵婧子，周沐野，熊晔蓉，等.气相色谱法测定辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的脂肪酸组成[J]. 中国药品标准，2021，22(2)：140

ZHAO JZ， ZHOU MY， XIONG YR， et al. Determination of the fatty acid composition in caprylocaproyl polyoxylglycerides by gas chromatography[J].Drug Stand China， 2021， 22(2)：140

作者：方欣欣1，章娟2，陈蕾3，邱娟2，邵泓1，郑璐侠1

（1. 上海市食品药品检验所，上海 201203；2. 广州市药品检验所，广州 510160；3. 国家药典委员会，北京 100061）