体外诊断试剂是包括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，对人体样本(体液、细胞、组织样本等)进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品(物)、质控品(物)等。随着现代生物学技术的不断发展，诊断试剂的技术含量不断提高，品种不断增多，应用范围也越来越广，已远远超过单纯作为临床诊断的辅助工具，在疾病的预防、疗效判定、药物监测、健康状态的评价以及遗传性疾病的预测等领域，正发挥着越来越大的作用。在从事体外诊断试剂标准工作中遇到的问题，进行初步探讨，并提出以下几点建议。

1．增加试剂批间精密性的检定

精密性分为批内精密性和批间精密性，是评价试剂检测样品随机误差的指标，一般通过重复检测某一特定样品，并分析其数值的一致性来评价该项指标，在标准中以变异系数的百分比来表示。不同试剂对变异系数的要求不同，通常采用Shah法，要求试剂的批内和批间变异系数不超过15％，某些特殊试剂的变异系数不超过20％。

诊断试剂的标准中一般都设有批内精密性的检定项目，该项检定通常是对同一样品检测10次，计算变异系数。然而，不同浓度样品对试剂反应的动力学不同，其检测误差也不同。因此，为了在试剂的检测范围内更好地评价其精密性，应选择包含高、中、低浓度的样品用于精密性的检定，其中高、低浓度应分别为试剂检测范围的上限和下限。

目前，许多已被批准上市用于血源筛查或临床诊断和治疗监测的诊断试剂标准中没有设立批间精密性的检定项目，试剂的批间差异大，给血站筛查和临床监测带来了困难。中国药品生物制品检定所的王佑春等对10家HIV抗体批批检试剂的批间精密性进行分析，通过各批试剂检测4份样品的S／CO值，计算批间的变异系数，结果发现变异系数小于15％的批次仅占15％，无一家试剂检测4个样品的变异系数均低于15％，表明HIV酶免试剂不同批次之间存在差异，应进一步改进与完善。试剂的批间差异大反映了试剂生产工艺不稳定，在制备过程中可能存在问题，应进一步提高试剂的质量，建立诊断试剂批间差异的质控品，并在质量标准中加入批间精密性的考核指标。

2．建立更多的国家标准物质

目前，诊断试剂检定所采用的标准物质有两种，一种是国家统一的标准物质，这对于控制各生产企业的产品质量十分有利；然而随着诊断技术的不断发展，体外诊断试剂的不断增多，涉及的学科领域日益广泛，部分诊断试剂没有国家统一的标准物质，只能采用各生产企业自制的内部质控品或购买国外的纯品作为标准物质对产品进行检定，难以控制试剂的质量。特别是对于定量诊断试剂，由于不同厂家之间的量值溯源标准不统一，很难衡量诊断试剂定量的准确性，因此应建立更多国家标准物质，以控制诊断试剂的质量。标准物质的建立以及生产、验证、保存耗时费力，因此，判断是否需要建立标准物质以及开发标准物质的先后顺序显得十分重要。

世界卫生组织(WHO)负责建立国际生物标准物质，并制定了3个条件：

①具有明显的医学价值和发展前途的新品种，并已有生产单位生产，其效价和安全性必须用生物检定方法评价；

②在生物试验或诊断试验中所采用的对照，必须通过国际生物标准物质校正；

③在医学研究和临床诊断中，需用生物检定方法表示被测物的质或量，且这些数据需要相互比较。另外，在2004年WHO生物检定专家委员会会议上，又提出了优先建立国际生物标准物质的原则：①已建立的国际生物标准物质需要更迭时，优先于建立新的标准物质；②拟建立国际生物标准物质用于已批准的新生物制品的质量控制或用于已建立的体外诊断方法，优先于尚处于研究阶段的产品或方法；③拟建立国际生物标准物质用于多种产品和一种方法；④拟建立国际生物标准物质用于对公共卫生影响较大的疾病所用的生物制品或体外诊断试验方法的质控，优于用于其他疾病的生物制品和诊断方法；⑤拟建立国际生物标准物质用于对全球公共卫生影响较大的疾病所用的生物制品或体外诊断试验方法的质控，优先于用于对地区性公共卫生有影响的疾病所用的生物制品和诊断方法；⑥优先建立参考试剂用于生物制品管理和科研均有需要的品种。与建立国际标准物质类似，我国建立诊断试剂的国家标准物质也应考虑建立的条件和优先建立的原则，如优先建立已经批准生产的诊断试剂所用的标准物质；与独家企业生产的诊断试剂相比，优先建立有多家企业生产的诊断试剂所用的标准物质；优先建立用于对我国公共卫生影响较大的疾病以及诊断后对控制疾病传播有极大意义的疾病的诊断试剂所用的标准物质；与区域性流行病相比，优先建立用于全国范围疾病预防控制的诊断试剂所用的标准物质。

3．保持参考品的稳定性

几乎所有用于血源筛查诊断试剂的参考品均来自病原微生物感染者个体，因此，每次采集的血浆数量有限，而由于国家对血源筛查诊断试剂实行批批检的管理，参考品用量很大，因此，一般情况下参考品每隔1～2年就需要重新制备。每次更新换代，生产单位都可能会调整工艺参数或配方，以符合参考品的要求，达到通过检验标准的目的，甚至还会变更试剂生产的主要原料一生物活性材料。这样，一方面易造成试剂生产单位违规，另外一方面会影响试剂的检测嗜性，此问题在换代当时不能反应出来，问题暴露时，往往参考品又开始新一轮的换代，如此形成不良循环。因此，建议提高参考品批间的稳定性，延长参考品的有效期，尽量降低参考品更新换代对试剂质量的影响。

4．修订无菌检查项目

按照目前诊断试剂的国家标准要求，半成品需要进行无菌检查。用于体外的诊断试剂进行无菌检查的目的与一般药物不同，主要是避免试剂染菌后影响其灵敏度、特异性等质量评价指标。但实际上，由于在半成品中已加人大量防腐剂，按照现有的生产工艺和条件，大多数诊断试剂可以保证在有效期内不滋生细菌，进而影响检验结果，并且考核试剂质量的项目在半成品和成品阶段均要进行检定，因此该项检查意义不大，大部分的企业也并未严格按照该项标准进行检验。建议在不影响诊断试剂质量的条件下，将无菌检查项目修订为生产单位结合自己的产品特点和生产工艺条件自主选择。

5．提高试剂盒的灵敏度和特异性

灵敏度和特异性是评价体外诊断试剂质量的重要指标，在保证试剂特异性的条件下提高灵敏度，对于提高试剂的质量，确保检出率具有重要意义。

以乙型肝炎表面抗原(HBsA~)酶联免疫试剂盒为例，我国为乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区，每年国产的HBsAg酶联免疫试剂盒使用量约为2．4亿人份，不仅用量大，而且该试剂的质量对确保临床诊断的准确性和输血安全，进而预防和控制乙型肝炎在人群中的传播具有十分重要的意义。吴君对经该种试剂检测为HBsAg阴性的献血员进行核酸检测，发现HBVDNA阳性率为1．44％；二次筛查后的血清，经核酸检测，漏检率仍有0．49％。i，这些假阴性献血员造成的输血隐患主要是由于所用酶联免疫试剂盒的灵敏度较低，对弱阳性样本漏检造成的。目前，我国质量标准对HBsAg不同亚型灵敏度的要求是：adr亚型为0．5ng／ml，adw亚型为1．0ng／ml，ay亚型为1．0ng／ml，从试剂批批检定结果来看，国产试剂均可达到该项要求。然而，吴星等对我国国产试剂盒与进口试剂盒进行对比研究中发现，国产试剂盒的灵敏度较圉外同类试剂盒低4～l6倍。因此，该试剂盒的灵敏度标准有必要进一步提高。国产试剂盒较同类进口产品灵敏度低的原因，可能与部分试剂采用一步法，抗原抗体反应时间不够充分，所用的单克隆抗体来源不稳定、纯化T艺不够先进等因素有关之一。

由于诊断试剂品种多样，技术发展快，影响其质量的因素很多，除了本文提到的一些共性问题外，还存在各种试剂自身以及检测物的特性等个性问题，研究者应不断研究解决质量标准中存在的问题，进而提高完善质量标准，促进诊断试剂质量的不断提高。