医疗器械无菌检验常见问题答疑

 

Q1、薄膜无法抽滤干，l滤膜的边缘与底部有液体，对检验有影响吗？有可能产生污染吗？

 

答：有影响。因薄膜边缘液体过多，会培养出成片的菌苔，结果菌落无法计数，导致结果不准确。

 

Q2、空白对照和阴性对照有什么区别？

 

答：空白对照是原有的状态，没加任何处理因素。阴性对照目的是排除假阳性。

 

Q3、无菌检查环境是万级+局部百级吗？

 

答：按《中国药典》2020版无菌检查环境要求是：千级+局部百级（B+A）。

 

Q4、医疗器械无菌实验室环境要求：是B+A还是C+A？一定需要按照药典来吗？

 

答：1、《中国药典》无菌试验环境要求是（B+A）；

 

2、因为检验依据是按药典进行，所以环境必须也按药典要求。

 

Q5、供试品方法适用性试验如何判定两者生长一样，是计数吗 ？

 

答：无菌检查属于定性试验，方法适用性试验不用计数。是用肉眼观察试验组与对照组的外观均生长良好则符合要求。

 

Q6、供试品方法适用性试验怎么判定一样，从主观上可以看出来吗？

 

答：方法适用性试验主要是对照组与含供试品的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。

 

Q7、供试品数量是否可以不按药典抽样，而参照按照GB/T14233.2-2005抽样？

 

答：若无菌检查检验依据是按《中国药典》2020版方法进行，那么取样数量和检验量均必须按药典标准要求。

 

Q8、无菌检查可不可以按照GB/T14233.2的检验数量来抽样，按药典进行检测？

 

答：参照（第7题）若是注册检验，首先送检方要与监管部门受理方沟通，说明原因，得到许可，必要时还要提交申请说明。

 

Q9、无菌检查，GB/T 14233.2-2005标准还能参考吗？

 

答：因为《中国药典》供试品无菌检查法要求必须进行方法适用性试验，防止结果出现假阴性现象，检测方法科学，可靠，结果准确。建议：试验前和试验中的局部百级监测方法可以参考GB14233.2-2005无菌试验第三章。

 

Q10、药典上为什么说薄膜过滤法是无菌仲裁法？

 

答：因为药品检验中，只要供试品性质允许，薄膜过滤法是首选。

 

Q11、无菌检查中薄膜过滤法的时候可以和直接法一样，一个供试品一组培养器接种吗？然后取样也只有11个，这样合适吗？

 

答：不可以。薄膜过滤法不是一个培养器过滤一个供试品的浸提液，而是至少5个供试品的浸提液集中混合过滤在一只培养器中。直接接种法是两种培养基分别等量接种10管，另加一个供试品做阳性对照。（上市抽样参照1101表2）。

 

Q12、如果微生物限度检验量3个，薄膜过滤法做的时候浸提液是3个总量还是一个一个做吗？

 

答：微生物限度检验量是3个，将3个样品浸提液全部过滤，结果菌落总数除以3就得出一个样品的含菌量。

 

Q13、药典表1和表2，这两个表的取样量有什么区别，表1是成品出厂检验的取样数量的依据，表2指的是注册送检数量的依据吗？

 

答：表1出厂检验的取样数量的依据；表2指的是注册送检数量的依据。

 

Q14、无菌检查每次阳性对照只需用金葡一种菌就可以了吗？

 

答：无菌检查阳性对照选择是根据产品特性，通过方法适用性试验得知产品无抑菌作用或抗G+菌为主的供试品，无菌检查时阳性对照只选用金葡菌就可以。

 

Q15、不溶性微粒检测时4个检验量浸提液一块检测还是分别做？

 

答：标准依据有说明的，单个或合并都可以。若4个样品浸提液合并检测，结果根据取样体积与每个容器的标示装量体积，计算每个样品的微粒数。

 

Q16、方法适用性试验是否需要定期做再验证？

 

答：不需要。当检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，检查方法应进行重新试验，否则不需要。

 

Q17、非无菌微生物检查，培养基做无菌性检查和灵敏度检查吗？

 

答：不用。非无菌微生物检查是定量检查法，培养基质量管理是需要做计数培养基适用性检查和计数培养基适用性试验。

 

Q18、怎么样才能得到差不多100cfu的菌液？ 

 

答：取培养好的增菌液，用适宜的稀释液进行梯度稀释，在适宜稀释级取0.5ml或1ml菌液，倾注或涂布于固体培养基进行计数来确定。

 

Q19、菌种可以采用25%甘油零下20°冷冻保藏吗？1代菌种可以作为阳性菌吗？

 

答：菌种可以采用25%甘油零下20°冷冻保藏。无论哪一代，都必须增菌培养是用新鲜培养物，进行梯度稀释，在适宜稀释级取0.5ml或1ml菌液,倾注或涂布于固体培养基进行计数得到不大于≤100cfu的菌液才可以作为阳性对照。

 

Q20、无菌检查阳性每个样品都做吗？

 

答：不是。因为无菌检查阳性对照菌选择是根据供试品的特性决定的（参照14题）。

 

Q21、药械组合的产品采用什么无菌方法合适？

 

答：无菌方法合适用性选择：若小型配件产品可选择直接法，大件产品或含有抑菌成分产品选择薄膜法。

 

Q22、薄膜过滤法会不会堵塞过滤膜？

 

答：根据产品特性选择滤膜规格。

 

Q23、同一批样品取三件 每个样品都需要加金葡做阳性吗?

 

答：不需要。无菌检查，同一批样品，若产品不含有抑菌成分，同一批样品选择金葡只做一个阳性对照。（适量FTM培养基+接种规定量供试品+不大于100cfu)。

 

Q24、液体生物制品灭菌时，阳性菌选择枯草可以吗？

 

答：不同的灭菌方法选择不同的灭菌生物指示剂。如：

 

1、湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子；

 

2、干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子；

 

3、辐射灭菌法最常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子；

 

4、环氧乙烷灭菌中选择枯草芽孢杆菌孢子等等。

 

Q25、微生物限度测试的时候经常遇到薄膜四周有白色的菌，不知道是什么？

 

答：原因是平板不能过于湿润或滤膜没有完全抽干，四周就长出成片菌苔。

 

Q26、平板做好后有水蒸气，是否应该再用鼓风干燥箱烘干一下呢？

 

答：最好在无菌室净化操作台百级条件下，打开通风系统，同时打开紫外灯进行吹扫，以防污染。

 

Q27、直接接种法的阴性对照需要加什么？这个阴性对照的装量量是同供试品的培养基装量一致吗？如供试品培养基800ml，那阴性对照培养基也是800ml吗？

 

答：第一问：供试品无菌检查时直接接种法的阴性对照是加稀释液或相应的溶剂。与试验同时进行，同法操作，不得有菌生长，但所加体积不得大于培养基体积10%；

 

第二问：装量一致；

 

第三问：是的。应该是同等条件，只是所加内容物不同。

 

Q28、培养基适用性试验是六种菌，生孢梭菌的培养基，我们不用，可以不买这个菌吗？

 

答：不可以。药典要求每个试验菌逐一进行方法确认。

 

Q29、现在菌种斜面二代是不让卖了吗？

 

答：不确定。可以找一个有资质的菌种供应商联系一下，要求对方必须能提供菌种溯源证明及菌种质量分析证书。

 

Q30、抽太干有没有影响吗？

 

答：滤膜抽干没有影响。因为操作完毕立即将滤膜贴于相应的琼脂培养基上。

 

Q31、微生物革兰氏染色鉴定用的什么显微镜？

 

答：普通光学显微镜。