Abstract: Characterization of human parvovirus B19 and its effects on the safety of blood/blood products were systemically analyzed, and foreign safety control strategies of human parvovirus B19 were described. It provides a valuable reference for the establishment of relevant standards and guidelines in China, which ensures the viral safety of blood/blood products.

 

Key words: human parvovirus B19; blood/blood products; safety; screen

 

血液制品的病毒安全性是血液制品的关键质量属性，各国技术法规、指南都有严格的要求和规定。研究证明B19(Human Parvovirus B19，B19)可通过血液传播，对血液制品的病毒安全性带来挑战。本文通过系统分析B19的特征，B19对血液制品安全性的影响和国外对B19的风险控制策略，探讨我国对血液制品B19污染控制的风险管理。

 

1  B19的基本概况

 

1.1  病毒特性

 

B19是一种DNA 病毒，由一线状单链DNA和衣壳构成；DNA链约5.5 kb，含正链和负链各50%；衣壳蛋白VP1、VP2、VP3 为其结构蛋白，另有非结构蛋白Ns1[1]。B19无脂包膜，直径小(约19 nm)，具有良好的理化耐受性。病毒分为三种基因型，其中基因I型为原型分离株，基因II型包括A6、Lili株及相关分离株，基因Ⅲ型包括A9株及相关分离株[2]。

 

1.2  流行病学

 

B19 感染普遍存在，儿童、孕妇、造血功能障碍和免疫缺损者为易感人群。传播途径以呼吸道、飞沫为主，也能通过血液/血液制品传播。国外研究发现，大约40%～60%的成年人都曾感染过B19，5岁以下儿童及20 岁以上成人其阳性率分别为2%和49%[3]。1991年，王绮云报道了我国有B19感染，正常育龄妇女阳性率为29.2%，儿童为9%[4]。

 

1.3  B19感染风险

 

经血液/血液制品传播B19，可能导致抵抗力弱的新生儿、婴幼儿及老人引起贫血危象，造成造血细胞的损伤；对于造血功能障碍或低下和免疫缺陷的人群，可引发多脏器多系统疾患[5]。孕妇感染B19 后对胚胎的致死性强于致畸性，可引起流产、死产和水肿型死胎[6]。

 

1.4  B19检测方法

 

1.4.1  抗体检测技术  抗体检测是目前B19感染临床诊断和流行病学调查的主要方法，通常使用商用 ELISA试剂盒、 Western Blot 或免疫荧光法对B19特异IgM、IgG抗体进行检测。上述方法不能检测出处于“窗口期”的病毒携带者，容易造成漏检。

 

1.4.2  抗原检测技术  B19抗原检测的有效方法较少，从最初的对流免疫电泳试验到受体介导的血细胞凝集测定法(RHA)。上述方法操作简便、快速且经济实惠，适用于大规模的样本筛查，但灵敏度和特异性低。

 

1.4.3  核酸扩增检测技术(NAT)  NAT能有效缩短“窗口期”，特异性强，灵敏度高，常用于B19感染急性期及慢性期的病人、献血者/献血浆者血液的筛查。实时定量核酸扩增(Q­PCR)是目前最常用的技术。NAT在欧美发达国家已经作为血液制品生产过程中检测 B19载量的一种在线控制措施。

 

2  B19对血液制品安全性的影响

 

2.1  B19在献血/献浆者人群中的感染情况

 

相关研究报道显示，1999年­2015年期间，我国献血者人群中B19DNA阳性率在0.40%～6.33%[7-­12]。

 

1994年，Lefrère等首次报道了B19在血液制品中的感染[13]。国内相关研究显示[14-18]，对单人份血浆、混合血浆及静注人免疫球蛋白、人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原的B19 DNA 检测结果呈现出不同的情况，其中混合血浆和凝血因子类产品阳性检出率较高，白蛋白和球蛋白类产品未检出阳性情况，混合血浆病毒载量在102～109 IU·mL-1范围。

 

2.2  血液制品生产过程对B19的病毒灭活与去除

 

目前我国相关技术法规和指南对血液制品生产工艺均要求进行病毒灭活或去除。已经证明人血白蛋白和免疫球蛋白的制造工艺中的低温乙醇工艺及压滤工艺，对B19有良好的去除能力[19]。凝血因子类产品为大分子蛋白，分子形状不规整，原料血浆中可能污染的B19通常随着血液制品生产过程中逐级分离提取过程进入凝血因子类大分子蛋白的组份中，导致该类产品污染风险明显高于其他类血液制品。因此，《中国药典》自2005版起，要求凝血因子类产品在生产过程中应采用经批准的方法去除和灭活脂包膜和非脂包膜病毒[20]。我国目前上市的凝血因子类产品通常采用经典的物理或化学方法，结合膜过滤法与主体分离纯化工艺，对血浆蛋白活性几乎无影响，且病毒去除谱广，对B19的风险控制提供了进一步的安全保障[21]。

 

3  国外部分国家或机构对B19的风险控制策略

 

3.1  血液筛查

 

日本自20世纪90年代末开始对献血者进行B19抗原筛查，并对检测方法进行了不断优化[22]。德国从2000年开始对所有献血者进行B19DNA检测[23]。

 

3.2  原料血浆筛查

 

3.2.1  美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)  FDA于2009年建议在小规模混浆的条件下对原料血浆进行B19DNA检测，试剂应涵盖目前已知的所有基因型，同时需要对检测方法进行方法学验证，弃掉B19载量高的血浆，使混合血浆中B19病毒载量控制在＜104 IU·mL-1[25]。

 

3.2.2  欧洲药品管理局(European Medicines Agency，EMA)  2004年，EMA要求用于生产凝血因子类产品和抗D免疫球蛋白的血浆在混合血浆时应进行B19 DNA检测，要求B19载量控制在＜104 IU·mL-1[26]。《英国药典》(2021版)中也有同样的要求。

 

3.2.3  世界卫生组织(World Health Organization，WHO)  2005年，WHO 在“用于血浆蛋白分离的人血浆制备和控制推荐意见”中，推荐对原料血浆实施病毒筛查，筛查包括HBV、HCV、HIV、HAV、B19[27]。为保证检测结果一致性以及规范检测试剂的质量，WHO建立了B19检测的国际标准、第三代人细小病毒B19核酸国际标准品和第一代人细小病毒B19 核酸分型国际参考品[28，29]。

 

3.2.4  国际血浆蛋白治疗协会(PPTA)  2003年，PPTA提出将核酸检测B19载量作为一种在线控制措施，混合血浆中B19DNA含量不能超过105 IU/mL，并在2013年将此标准调整为104 IU·mL-1 [30]。

 

4  结语

 

B19具有经输血/血液制品输注传播的风险，国外采用NAT筛査控制B19病毒载量。目前的研究表明，我国原料血浆中存在B19 污染情况，尽管国家对血液制品生产过程均要求具有特定病毒灭活/去除工艺，依然需要高度关注相关风险。可基于献血浆者与血液制品安全性的系统研究，鼓励相关企业尽快开发B19DNA检测的商业化血源性筛查试剂，在此基础上参照国外的风险控制策略，逐步建立和完善我国相关技术要求，以最大限度降低和消除血液制品B19病毒污染及传播风险。

 

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