随着软胶囊应用越来越广泛，软胶囊开始被争相研发、仿制。软胶囊参比制剂的逆向解析工作也就成为了软胶囊研发至关重要一项的工作。

 

小编最近做了一个软胶囊的项目，其参比制剂的解析比较特殊，就写出来和大家分享讨论一下，欢迎各位留言互相探讨。

 

什么是软胶囊

 

软胶囊指将一定量的液体原料药物直接包封，或将固体原料药物溶解或分散在适宜的辅料中制备成溶液、混悬液、乳状液或半固体，密封于软质囊材中的胶囊剂。

 

软胶囊的组成

 

软胶囊由内容物、囊材两部分构成。

 

 

软胶囊参比制剂的逆向解析

 

对软胶囊的逆向解析主要包括囊材的逆向解析与内容物的逆向解析：

 

囊材的逆向解析

 

因为对后续工艺和内容物的影响，解析明白囊材的大致成分是非常重要的。囊材基本由胶料、增塑剂、水组成。

 

所以囊材的逆向解析就是为了弄明白这几种成分的比例。三者重量比例一般为1：0.2~0.4：0.8~1.3。

 

现在我们比较常用的胶料为明胶，增塑剂为甘油；还可以在囊材中加入适宜的防腐剂、遮光剂、色素等。其大小与形态有多种，有球形、椭圆形、圆柱形、鱼形、滴形、葫芦形等。

 

（1）甘油含量的测定

 

参考2015年中国药典四部附录-药用辅料 ，甘油含量测定方法如下：

 

取本品约0.1g，精密称定，加水45ml，混匀，精密加入2.14%高碘酸钠溶液25ml，摇匀，暗处放置15分钟后，加50%（g/ml）乙二醇溶液10ml，摇匀，暗处放置20分钟，加酚酞指示液0.5ml，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至红色，30秒内不褪色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于9.21mg的C3H8O3。

 

在测定甘油含量的过程中需要特别注意：软胶囊的囊材中不仅含有甘油，还有明胶、水，也可能含量少量其他成分（可能有防腐剂、遮光剂、色素），忽略未知的较少量的其他成分，要测得囊材中甘油含量，囊材中的明胶、水则一定不能干扰甘油的测定，所以说需要进行明胶干扰试验及水干扰试验。

 

现假设囊材中甘油:明胶：水=0.5:1:1 。

 

明胶干扰试验

 

精密称定明胶0.2g（相当于囊材中0.1g的甘油），置烧杯或三角瓶中，加入45ml水，密封，水浴70℃使溶解，冷却至室温，精密加入2.14%高碘酸钠溶液25ml，摇匀，暗处放置15分钟后，加50%(g/ml)乙二醇溶液10ml，摇匀，暗处放置20分钟，加酚酞指示液0.5ml，用氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)滴定至红色，30秒内不褪色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L）相当于9.21mg的C3H8O3。

 

结果：囊材中明胶不会干扰甘油的含量测定。

 

水干扰试验

 

精密称定水0.2g（相当于囊材中0.1g的甘油），置烧杯或三角瓶中，加入45ml水，密封，水浴70℃使溶解，冷却至室温，精密加入2.14%高碘酸钠溶液25ml，摇匀，暗处放置15分钟后，加50%(g/ml)乙二醇溶液10ml，摇匀，暗处放置20分钟，加酚酞指示液0.5ml，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至红色，30秒内不褪色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于9.21mg的C3 H8O3。

 

结果：囊材中水不会干扰甘油的含量测定。

 

最终结论：采用此方法测定囊材中甘油含量，囊材中水、明胶不干扰其测定结果。

 

根据上述试验结果囊材中甘油测定试验方法优化如下：

 

取软胶囊数粒，剪开，弃去内容物，用无水乙醇将囊壳上残留内容物洗净，挥干，将囊材皮剪碎（此步操作应尽量在较低湿度下完成，且尽量快速操作，以免操作时间过长，导致吸潮），精密称定处理后囊材约0.3g，精密称定，置烧杯或三角瓶中，加入45ml水，密封，水浴70℃使溶解，冷却至室温，精密加入2.14%高碘酸钠溶液25ml，摇匀，暗处放置15分钟后，加50%(g/ml)乙二醇溶液10ml，摇匀，暗处放置20分钟，加酚酞指示液0.5ml，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至红色，30秒内不褪色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于9.21mg的C3H8O3。

 

（2）水分的测定

 

软胶囊的生产过程中，水分含量是一个重要的控制指标。因为软胶囊壳中的水分对内含药物会有影响。

 

同时，也会影响其软硬程度、弹性、崩解性能；水分过多也会造成粘连、微生物滋生等等。

 

一般认为，胶囊壳含水量与崩解时间呈正比，其水分增多可能加速明胶自身的氧化。

 

所以胶囊壳水分含量的高低会直接影响药品的质量、稳定性和使用期限。控制好胶囊壳的水分含量至关重要。而解析参比制剂囊材中水分，可以为软胶囊制备工艺提供参数。

 

常见水分测定方法如下

 

解析参比制剂的过程还是以准确和快速为主，所以我们一般采用卡尔费休法测定囊材中的水分，具体步骤如下：

 

步骤1：

 

取软胶囊数粒，剪开，弃去内容物，用无水乙醇将囊壳上残留内容物洗净，挥干，将囊囊材皮剪碎（此步操作应尽量在较低湿度下完成，且尽量快速操作，以免操作时间过长，导致吸潮），精密称定囊材适量；

 

步骤2：

 

选择可以溶解软胶囊囊材的溶剂；通常卡尔费休法是采用甲醇作溶剂，溶解样品进行水分测定，囊材在甲醇中是无法溶解的，所以需要筛选一种溶剂，将囊材溶解，在进行水分测定；

 

可以选择将甲醇与其他试剂混合作为溶剂，例如：甲醇、二氯甲烷或其他溶剂等混合。

 

步骤3：

 

将处理后囊材及溶剂同置西林瓶或顶空瓶中，加盖、密封，振荡使溶解，作为供试品溶液；

 

步骤4：

 

测定溶剂的水分；

 

步骤5：

 

测定供试品溶液的水分，扣除溶剂中的水分，测定结果用溶剂中的水分进行校正，则可以得到囊材的水分。

 

（3）明胶

 

一般情况下，囊材中主要组成为甘油、明胶、水，因此知道囊材水分（%）和甘油含量（%），则可初步推测出大约1粒软胶囊中明胶的质量。

 

计算公式如下：

 

明胶（%）=100%-水分（%）－甘油含量（%）。

 

（4）其他成分

 

囊材中可能还有少量的其他成分，例如：防腐剂（羟苯甲酯），这里小编给大家分享下羟苯甲酯的测定方法。

 

参考：国家食品药品监督管理总局药品评审中心“辅料数据库”项下“辅料信息详细”，可知，羟苯甲酯最高含量可达0.1%。

 

采用高效液相色谱法，参考专利“一种测定软胶囊囊材中羟苯乙酯含量的方法”，确定最终色谱条件。

 

色谱条件如下：

 

色谱柱：Alltima C18（250mm×4.6mm，5μm）；

 

流动相：甲醇-水=50:50

 

溶剂：流动相

 

波 长：254nm；

 

流 速：1.0ml/min；

 

柱 温：40℃；

 

进样量：20μl；

 

对照品溶液：称取羟苯甲酯酯对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含羟苯甲酯约0.05μg的溶液，摇匀，即得。

 

供试品溶液：称取参比制剂软胶囊处理后囊皮（取本品剪开，除去内容物，用无水乙醇将囊壳上残留内容物洗净，挥干，将囊皮剪碎）0.5g，置25ml量瓶中，加溶剂适量，80℃水浴溶解，冷却至室温后，加溶剂定量稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

 

内容物的逆向解析

 

软胶囊的内容物一般有以下几种情况：

 

（1）内容物直接是液体原料

 

单一的原料解析相对来说比较简单，现在很多原料的测定方法可以从中国药典甚至于一些文献中就可以找到，如果这些中没有新开发一种含量测定方法也不是比较难。

 

（2）内容物为原料药与适宜的辅料制成

 

每个项目的辅料不一样，所以内容物的辅料解析方法是需要根据在研项目的具体辅料情况在进行开发，大家需要先根据资料查出其辅料的大致组成，或者根据药物性质推测其可能添加的辅料，

 

然后针对某种辅料制定的分析方法来进行逆向解析。

 

例如：有的药品，为了防止药液被氧化，会在内容物中增加抗氧剂。

 

在此，我给大家分享一种抗氧剂（二丁基羟基甲苯，简称BHT）逆向解析思路。

 

采用高效液相色谱法

 

参考2015年版中国药典四部“药用辅料”项下“二丁基羟基甲苯”中含量测定方法；

 

①确定色谱柱

 

选择一根 C18（250mm×4.6mm，5μm），不指定色谱柱品牌，BHT保留时间合适、与相邻杂质分离较好、峰形较好即。当然出峰时间主要还是取决流动相的选择。

 

②流动相的选择

 

流动相：甲醇-水（9:1），采用甲醇-水体系，此体系就可以将BHT洗脱出来，当然具体比例可根据出峰情况调整。

 

③波长的选择

 

波长：278nm；可以参考这个波长，或是进行BHT紫外波长扫描试验；

 

不同的溶剂溶解BHT，波长扫描的结果会略有差别，由于软胶囊内容大多为油状液体，也可能为混悬液、乳状液或半固体，所以对于溶剂选择也是比较麻烦，可能用到平时不常用到的溶剂.

 

比如，辅料若为大豆油的话，就可以采用适量三氯甲烷进行先溶解，在选用其他合适的试剂进行稀释。

 

④浓度选择

 

曾有软胶囊的专利中提到“药液油中可加入占药液油比重0~0.2%二丁基羟基甲苯作为防腐剂”，由此可以看出，二丁基羟基甲苯的加入量实际上是很小的，若以BHT占0.2%计算，供试品浓度达到100mg/ml时，BHT对照品的浓度仅为0.2mg/ml，所以，为确保BHT测定的准确度，应尽量选择合适的溶剂，增加供试品的浓度。

 

 ⑤专属性

 

小编在这里强调一下，方法建立以后，不要着急进行测定试验，需要对此方法进行专属性试验；

 

以二丁基羟基甲苯为例：内容物中有主成分、二丁基羟基甲苯，可能还有其他辅料，那么我们就需要对已知的或是推测可能含有的辅料，均进行定位，需确定以下两点：

 

★ 二丁基羟基甲苯在此条件下，需出峰时间合适、与相邻杂质均分离较好，且主峰位置无其他辅料或杂质检出；

 

★内容物中主成分及已确定含有的辅料（若有紫外吸收）均在此条件下需要能洗脱出峰，以确保不会有杂质峰残留在下一针，影响测定结果。

 

上述软胶囊逆向解析的经验，希望对大家有所帮助。