FDA关于ANDA强制降解试验的观点。

强制降解试验

强制降解试验也称破坏性试验，试验目的明确。预测原料药的稳定性或影响制剂的纯度、有效性和安全性的因素。

了解不同破坏条件下药物的降解产物和降解途径。强制降解试验可以为分析方法的建立、说明书的制定和处方设计的确定等提供有益的参考。

强制降解试验存在的问题

仿制药申请时提供的强制降解试验研究数据不完整是申报的一大缺陷。美国仿制药申报常见缺陷解读（CMC部分）。

原料药在各破坏条件下均不产生降解。请重复破坏试验以获得足够的降解产物，若没有产生降解，请提供依据。

如果破坏条件过于剧烈，导致大部分药物均被降解。请用温和的破坏条件或减少样品暴露时间以产生相关的降解产物。

请注意：即使已经用含量测定的方法对破坏的样品进行了检测，为了验证有关物质的检测方法具有稳定性指示功能，破坏的样品也要应用有关物质的方法进行测定。

请提供所做的验证试验数据，以证明用以检测未破坏样品和破坏样品的方法能够检测出所有的降解杂质。

请对破坏样品中已知和未知的降解产物进行列表总结。

请确定检测软件对峰纯度检测的峰高要求。

请说明破坏样品质量不守衡的理由。

请鉴别原料药与辅料相互作用产生的降解产物。

光稳定性研究表明药品对光敏感，请解释这一点是如何在分析方法，生产工艺以及药品运输过程反映出来的。

如何进行强制降解试验

降解条件

典型的强制降解主要包括四种机制：高温、水解、氧化和光降解。

选择适当的破坏条件，如酸碱和氧化剂的浓度、破坏温度、适宜的破坏时间，以实现样品最佳降解程度。

样品破坏过度，会产生二次降解产物，这不是降解试验的目的。因此，控制样品降解达到预期水平是十分必要的。

通常认为样品降解量应在5~20%之间。对于含量限度为标示量的90%~110%的小分子药物，即使在文献中有更广泛的推荐范围作为参考（例如10~30%），通常允许10%的降解量。

光稳定性

光稳定性试验是强制降解试验的重要组成部分，对光敏感药物尤为重要。ICH Q1B指导原则提出了新原料药和制剂的光稳定性试验条件。

原料药、固体/液体制剂，应暴露在总照度不低于1.2×106 Lux •hr，近紫外能量不低于200w•hr/ m2的条件下，相同样品应同时暴露在日光灯和近紫外灯下。可控制合适的温度以减少局部温度变化效应。

热稳定性

热破坏试验条件（例如：干热破坏和湿热破坏），应比ICH Q1A中推荐的加速试验条件剧烈。

固体原料药和制剂应同时暴露于干热和湿热条件下，而液体制剂可以暴露于干热条件下。

建议破坏温度应高于加速试验温度的10℃，相对湿度为75%或者更高。破坏试验也可以在更高温度条件下进行短时间破坏。对破坏样品进行多个时间点检测，能够充分提供降解速率、一级与二级降解产物的信息。

酸碱水解

原料药与制剂应在常温或更高温度条件下，以溶液状态进行酸碱水解破坏试验，酸碱种类和浓度的选择取决于药物本身的特点。

其中一种酸碱破坏试验方案为样品于室温条件下放置，在不同pH条件下破坏两周，并且破坏程度建议应不高于15%。

酸降解一般采用0.1mol/L-1.0mol/ L的盐酸或硫酸，碱降解采用0.1mol/L-1.0mol/ L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液。

了解化合物相关性质对于选择破坏条件是有用的，例如，一个化合物含有酯基，对碱是不稳定的，则可选择较低浓度的碱进行破坏，不同时间点对样品进行检验，了解降解速率和区分一级、二级降解产物。

氧化破坏

氧化破坏试验相对较复杂，过氧化氢应用较广泛。

氧化剂种类和浓度的选择取决于药物本身的性质。原料药在溶液状态下，制剂在溶液或固体状态下进行氧化破坏。

在不同时间点对样品进行检验，选择所需的降解水平，不同的降解条件会产生相同或不同的降解产物，降解的途径和程度取决于样品的官能团和降解条件。

分析方法

试验方法

首选反相高效液相色谱法：与水和有机溶剂具体良好的相容性，准确度好，灵敏度高，能够检测极性化合物。选择合适的色谱柱、柱温，调节流动相的pH值，达到各杂质峰的分离。

低保留，极性较大的杂质会在溶剂峰前出峰。梯度洗脱，流动相中有机相比例由低到高过度，能够检测出低保留极性大的化合物和高保留的非极性化合物。

也可以用梯度方法对破坏样品进行检测，评估目前的洗脱方法是否能够对样品进行有效的检测，选择的样品溶液和流动相应能充分反映和检测出药物本身、潜在杂质和降解产物。

破坏样品的制备方法应尽可能地模拟分析过程中所用的样品制备方法。对酸碱破坏样品溶液进行酸碱中和稀释是必要的。破坏样品的图谱应与空白溶液和未破坏样品的图谱进行对比，从而确定各降解产物的降解途径。

分析方法应有足够的灵敏度以检测出较低水平的杂质，并且峰响应值应在线性范围内的峰响应值以下。

分析方法应能检测到稳定性研究过程中产生的所有杂质(浓度为报告限度浓度或更低)，依据ICH的要求和稳定性研究结果，来决定降解产物是否应该被鉴定和界定。（小编，强制降解产生杂质不一定要鉴定结构，能鉴定最好，长期，加速中产生的降解杂质需要研究结构）

常规检测方法或联用技术(LC–MS，LC–NMR)均可应用于降解产物的鉴别和界定。了解各杂质是否存在基因毒性警示结构。

当主峰和杂质峰紫外吸收图谱相似或者系统噪音水平过高从而掩盖了杂质或降解产物时，可进行多波长检测。

具有相同分子量和官能团的化合物会呈现出相似的紫外吸收图谱。这种情况下，需要改变色谱参数以实现色谱峰的分离。

如果被分析物、杂质和降解产物紫外吸收没有重叠，则应对样品进行多波长检测。

峰纯度检测

峰纯度是分析方法开发的辅助工具，当不同化合物共同洗脱时，依据化合物的光谱特性来反映峰纯度指标。

未破坏样品和破坏样品的峰纯度或峰均匀性是根据二极管阵列检测器的光谱信息确立的。

质量守衡

通过样品测量值、所有杂质和降解产物的测量值之和与未破坏样品初始值接近100%的程度来确定，在计算时适当考虑产生的分析误差。

尽量使所有的破坏样品均达到质量守衡。若样品质量不守衡，应进行深入研究，给出说明。挥发性杂质的潜在损失、非紫外吸收化合物的形成，不保留杂质，强保留杂质等情况都应被考虑在内。

研究终点

一些稳定药物在任意降解条件下均不会产生降解，可以通过在药物中加入已知杂质来建立分析方法，同时应保证各峰能够达到基线分离。