1  k的定义

保留因子（k）：固定相中的溶质分子总量（s）除以流动相（m）中的溶质分子总量得到。当化合物在固定相中溶质分子越多，K值越大，保留时间越长。

2 k的计算

（1）等度洗脱中，运用公式k=（tR-t0）/t0进行计算，其中t0约等于5x10-4Ldc2/F。式中L是色谱柱的长度，以mm为单位；dc是色谱柱的内径，也以mm为单位；F是流动相流速，以ml/min为单位；t0以分钟为单位；其中5x10-4Ldc2为色谱柱的死体积Vm。

举例来说，对于4.6mm内径的色谱柱，其死体积Vm近似为0.01L，因此对于一根150x4.6mm的色谱柱，如果使用流速为 0.5ml/min，那么t0=Vm/F=1.5/0.5=3分钟；然后根据待测样品的保留时间tR就可以计算出该色谱峰的k值了。

（2）在梯度洗脱中，条件比较复杂，k值计算公式为0.87tGf/vmΔΦs。其中tG为梯度时间，F为流速，Vm为色谱柱的死体积，ΔΦ为梯度范围，一般分子量为100-500Da的化合物S大约为4，根据此公式我们同样可以计算出梯度洗脱中化合物的k值。

3  k的使用原则

在进行HPLC方法开发时一般要求k为1到10，最大容许范围为2-20。在这个范围内我们可以得到又窄又高的色谱峰，同时化合物的分离能够达到最佳。如果k小于1时，化合物的分离就会很差；当化合物的k大于20时候，继续提高k值，化合物的分离度变化十分微小，但是保留时间却增加明显。