1.1选择灭菌程序

对于湿热灭菌来说，有两种常用的灭种程序：饱和蒸汽灭菌程序和空气加压灭菌程序。饱和蒸汽灭菌程序通常用于多孔/坚硬装载灭菌，空气加压灭菌程序通常用于液体装载灭菌。下面对这两种灭菌程序作简要介绍：

饱和蒸汽灭菌程序

按灭菌前排除空气的方式不同，饱和蒸汽灭菌程序分为脉动真空灭菌程序和重力置换灭菌程序。

Ø脉动真空灭菌程序

脉动真空灭菌程序在灭菌前通过机械真空泵将空气从腔室中抽走，常用于难以去除空气的多孔/坚硬装载的灭菌，比如软管、过滤器和灌装机部件。灭菌程序开始之前，对装载的处理很重要。如果每次抽真空至0.1个大气压，那么每个脉冲（抽真空-充蒸汽）将使灭菌柜内的空气减少90%或者1个对数单位。三次脉冲可使灭菌柜内的空气下降3个对数单位，有效地将空气去除99.9%。为了使装载处于正常状态，可能另需正压脉冲（充蒸汽至高于大气压，避免空气进入腔室）。通过这个方法，提高去除空气的效率，缩短平衡时间。在制定灭菌程序时，要准确地确定脉冲的次数和类型。

Ø重力置换灭菌程序。

重力置换灭菌程序的原理在于灭菌柜腔室中的冷空气比进入的蒸汽重，冷空气被从腔室顶部输入的蒸汽往下排挤到腔室的底部，并通过腔室底部的排水管排出。蒸汽往往通过导流档板或散流器输至灭菌柜腔室。蒸汽注入腔室的速度非常关键，如果蒸汽进入过快或分布不合理，装载的顶部或周围可能会夹带空气层。如果进汽过于缓慢，空气受热而扩散入蒸汽中，从而使排除空气更加困难。

重力置换灭菌程序排除空气的效率低于脉动真空灭菌程序，对排气比较困难的装载而言，不建议采用这类灭菌程序。

空气加压灭菌程序

对于液体装载灭菌，液体容器顶部常留有小部分气体(空气、氮气或其他惰性气体)。当液体被加热时，顶部气体膨胀，容器中的压力随之增大。冷却阶段，容器内的温度高于容器外，容器内的压力也会比腔室内压力大。为保持容器的形状和密封完好性，需空气加压，增大腔室的压力，降低腔室和容器内的压差。加压灭菌程序通常采用无油压缩空气。通入腔室的空气须先经过除菌过滤器过滤。为防止加入冷空气会引起腔室内的温度波动，空气在通入腔室前要预热。常见的空气加压程序有蒸汽-空气混合灭菌程序（SAM）和过热水灭菌程序。

Ø蒸汽-空气混合灭菌程序

程序以空气和蒸汽混合物为加热介质。当蒸汽中加入空气，产生高于一定温度下饱和蒸汽压的压力，这种灭菌程序即为蒸汽-空气混合灭菌程序。与饱和蒸汽灭菌相比，它的热传递速率低。灭菌结束后，常见的冷却方法是向灭菌柜夹套通入冷却水，保持空气循环冷却。也可通过在装载上方喷淋冷却水使其降温。

Ø过热水灭菌程序。

过热水灭菌程序是指在空气加压条件下，以过热水为加热介质进行灭菌。这个程序中，加压是为了保持水在高温下的液体状态。

1.2多孔/坚硬装载灭菌程序开发要素

多孔/坚硬装载灭菌重现性和获取无菌保证水平的最大风险是单个产品中可能夹带的空气，因此灭菌前，应确保充分地排除灭菌柜腔室和产品中的空气，同时灭菌过程确保向灭菌柜提供干饱和蒸汽。通常多孔/坚硬装载灭菌程序的开发需要从以下方面进行考虑：

装载最冷点

在腔室热穿透试验前进行热分布研究，画出装载的分布图，确定灭菌品中适当的监控点位置，确定装载中最难加热的部位。

装载的温度测试应取最难加热的物品（如质量大的、易包藏空气的、长的软管，或这类特性兼备的装载物品）。作温度分布图时，要比较装载类型对加热的影响（如比较排除空气的难易及大装载加热的难易程度）并将温度探头放置在最难加热的位置。

装载准备

多孔/坚硬装载的准备方式可有多种，包括但并不局限于以下示例：

Ø用可穿透蒸汽和空气的包装材料将装载包扎（如不脱落纤维的纸或其他聚合包装材料）

Ø加盖但不封闭的桶/盒（如带孔的不锈钢桶/盒)

Ø将装载放在静止或旋转桶式的容器中（如胶塞）

无菌生产中所用的物品必须加以包装或包扎，以便在使用之前保持无菌状态。包装材料需考虑空气及冷凝水的排除，避免微生物污染。

装载方式

在运行确认后及性能确认前，要确认装载的类型和方式，并有相应记录。装载方式的确定应考虑以下方面：

Ø装载不能接触腔室内壁。

Ø尽可能减小金属容器平面间的接触以及与灭菌车之间的接触。

Ø为方便去除空气及冷凝水，明确装载物的方位并有相应记录，如将桶倒置。

Ø质量大的装载应放在腔室中较低的架子上，尽量减少冷凝水所致的装载潮湿。

Ø控制灭菌柜中装载物的数量，如果预期装载物的量是变化的，则需确定最小和最大装载量。

Ø如果确认表明物品的摆放位置不影响灭菌效果，那么装载方式是可变的。

Ø应制定适当的SOP，便于相关操作人员执行操作。

运行参数

建立灭菌程序的关键要素是确定运行参数，以满足灭菌工艺设计的目标并确定它们属关键因素或重要因素。表1列出了建立多孔/坚硬装载灭菌程序参数时需要考虑的因素。

表1 多孔/坚硬装载灭菌程序主要参数

关键参数涉及产品的安全和有效性，关键参数不合格可能会导致灭菌的失败。重要参数保证日常灭菌运行处于“受控”状态，重要参数不合格时需调查并有文件证明对灭菌装载处理的合理性。

平衡时间

平衡时间表示去除空气并使装载达到灭菌条件的能力。即使最终达到了设定的灭菌温度，平衡时间的延长也表示去除空气或加热能力的不足。在程序开发中，尽可能减小平衡时间，采用以下方法可缩短平衡时间：

Ø确认装载正确放置，有效排除空气（如胶管不受挤压）

Ø增加真空或蒸汽正脉冲的次数

Ø提高真空脉冲的真空度

Ø优化装载方式