摘 要： 采用高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中α-三联噻吩。样品经甲醇超声提取20 min，以C18色谱柱进行分离，以乙腈-水（体积比为85∶15）为流动相进行洗脱，用荧光检测器测定，色谱峰面积外标法定量。α-三联噻吩的质量浓度在5～200 ng/mL范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，相关系数（r）为0.999 9，方法的检出限为10 ng/g。以霜类、乳液类、水剂类及液态油基类4种空白基质进行加标回收试验，在3种不同加标水平下，回收率为94.6%～98.6%，测定结果的相对标准偏差为0.6%～2.2%（n=6）。该方法样品处理简便、快捷，分析灵敏度高，可用于化妆品中α-三联噻吩的检测。
α-三联噻吩(又称为α-T)是一种光敏化合物，广泛存在于菊科植物如万寿菊、小万寿菊及孔雀草等，其相关提取物或作为香精成分运用于香水及其它化妆品中。因为其中含有α-三联噻吩，其相关提取物/油作为化妆品原料可能产生光毒性的安全问题。
通过文献调研，我国目前尚无化妆品中α-三联噻吩法定测定方法和限值标准，化妆品中α-三联噻吩的检测方法鲜有文献报道。目前植物中α-三联噻吩的含量检测方法包括荧光分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法等。《中华人民共和国药典(2020年版)》一部收载了禹州漏芦中α-三联噻吩含量的测定方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1%乙酸溶液为流动相，使用紫外检测器检测α-三联噻吩含量。α-三联噻吩本身具有荧光特性，在一定波长的光照下可以发出黄绿色荧光。α-三联噻吩在植物中含量较低，一般植物提取物添加到化妆品含量也很低，所以对α-三联噻吩检测方法要求灵敏度高，能够检测化妆品中痕量水平的α-三联噻吩。
广东省药品检验所陈桂琴课题组采用超声萃取-高效液相色谱法测定化妆品中α-三联噻吩，用荧光检测器测定，该方法样品处理简单、快速，测定结果准确、可靠。
1、 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
超高效液相色谱仪：SHIMADZU LC-20AT型，配荧光检测器、二极管阵列检测器，日本岛津仪器有限公司。
超声波清洗器：S300H型，德国Elma公司。
超纯水发生器：Milli Q Reference型，美国密理博公司。
电子天平：XS205DU型，感量为0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司。
α-三联噻吩对照品：质量分数为99.0%，源叶生物科技有限公司。
乙腈、甲醇：均为色谱纯，霍尼韦尔贸易(上海)有限公司。
正己烷、丙酮、冰乙酸：均为分析纯，广州化学试剂厂。
化妆品样品：万寿菊精油小滚珠18号、野生埃及万寿菊单方精油、万寿菊祛痘凝胶，市售。
1.2 标准溶液的配制
准确称取α-三联噻吩对照品10 mg (精确至0. 01 mg)，置于20 mL 棕色容量瓶中，用少量丙酮溶解，甲醇定容至标线，摇匀，配制成α-三联噻吩标准储备溶液。
用甲醇将α-三联噻吩标准储备溶液逐级稀释成质量浓度分别为5、10、20、50、100、200 ng/mL 的α-三联噻吩系列标准工作溶液。
1.3 色谱条件
色谱柱：Phenomenex Titank C18柱(250 mm×4.6 mm，5 µm，美国菲罗门公司)；流动相：乙腈–水(85∶15，体积比，下同)，流量为1.0 mL/min；荧光检测波长：激发波长为352 nm，发射波长为428 nm；柱温：30 ℃；进样体积：5 μL。
1.4 样品处理
称取化妆品样品0.5 g (精确到0.1 mg)，置于10 mL具塞比色管中，加入3 mL 甲醇，涡旋30 s，使样品分散均匀，用甲醇定容至标线，超声提取20 min，静置至室温，用0.22 μm尼龙66 滤膜过滤后，滤液作为样品溶液备用。
2、 主要结果与讨论
2.1 色谱条件的选择
2.1.1 检测器的选择
《中华人民共和国药典(2020年版)》一部收载了禹州漏芦中α-三联噻吩含量的测定方法，使用紫外检测器，检测波长为352 nm。α-三联噻吩具有荧光特性，在一定波长的光照下可发出黄绿色荧光。王玉健等利用荧光分光光度法测定α-三联噻吩，最大激发波长为352 nm，最大荧光发射波长为428 nm。本实验采用高效液相色谱法，配置荧光检测器及二极管阵列检测器，在同等色谱条件下测定α-三联噻吩，其中荧光检测器设置激发波长352 nm，发射波长428 nm，二极管阵列检测器设置检测波长为352 nm。结果表明，使用荧光检测器获取的α-三联噻吩方法检出限为0.5 ng/mL，使用二极管阵列检测器获取的方法检出限为为100 ng/mL，可见荧光法检出限更低，灵敏度高，可用于检测样品中的痕量α-三联噻吩。由于荧光检测法同时设定了特征的激发波长和发射波长，能够有效排除其它物质的干扰，选择性好，准确度高。综上所述，本实验选择荧光检测器作为检测器。
2.1.2 流动相选择
分别选择甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%乙酸溶液、甲醇-0.1%乙酸溶液4种流动相，考察其对色谱分离的影响。结果表明，4种流动相下的色谱峰形均良好。本实验选择乙腈-水作为流动相，目标物峰形良好，基线平稳，拖尾因子较小，且保留时间适中。
2.1.3 色谱柱及柱温的选择
为了考察不同色谱柱的α-三联噻吩出峰情况，分别选取了Phenomenex Titank C18 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK C18 MGⅡ柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK C18 UG120柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)三种型号色谱柱对α-三联噻吩标准储备溶液和样品溶液进行测定。结果表明，Phenomenex Titank C18 柱的色谱峰形对称、尖锐，保留时间适中，因此选择该型号色谱柱。
分别考察25、30、35、40 ℃柱温条件下α-三联噻吩的色谱行为，结果表明：当柱温升高时，α-三联噻吩保留时间逐渐前移，其它无显著变化。为了保护色谱柱和方便温度控制，选择实验柱温为30 ℃。
图1 α-三联噻吩标准溶液色谱图
2.2 样品提取溶剂的选择
α-三联噻吩不溶于水，可溶于甲醇、丙酮等溶剂。分别选择甲醇、丙酮、甲醇-丙酮(体积比为4∶1)混合溶液作为提取溶剂进行试验，结果表明用丙酮处理液态油基基质、乳剂基质、霜剂基质得到的样品溶液比较澄清，用甲醇处理得到的样品溶液比较浑浊。通过比较空白基质加标回收率，发现几种提取溶液的回收率在90%～100%之间，提取效果均能满足分析要求。考虑到丙酮挥发性较强，最终选择甲醇作为提取溶剂。
引用本文： 陈桂琴，张小媚 . 高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中α-三联噻吩［J］. 化学分析计量，2023，32（3）：34. (CHEN Guiqin, ZHANG Xiaomei. Determination of α-terthiophene in cosmetics by HPLC with fluorescence detector[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2023, 32(3): 34.)
