背景
2018年6月，全球监管机构收到一批缬沙坦活性物质中存在N-亚硝基二甲胺（NDMA）的报告，随后在雷丁替尼、二甲双胍、利福平等药物中也检出了N-亚硝胺杂质。同年成立了“亚硝胺国际战略小组（NISG）”，2020年底成立了“亚硝胺国际技术工作组（NITWG）”，旨在共享与亚硝胺相关的科学知识和当前对技术安全和质量问题的思考，并在可能的情况下促进成员辖区之间的技术融合。FDA及EMA相继出台了N-亚硝胺杂质相关的文件。本文将从N-亚硝胺杂质的控制策略、限度制定、控制方式等方面进行阐述。
一、 控制策略：
1、对于已上市药品通常采用三步方法来进行评估和控制亚硝胺杂质。
a）风险评估：上市许可持有人（MAH）进行风险评价，以确定API和/或成品药是否可能存在亚硝胺风险；
b）确认性检测：如果发现风险，MAH将接着进行确认性检测，以确认或排除亚硝胺的存在。MAH应尽快报告结果；
c）如果确认存在亚硝胺，MAH应通过提交变更，实施有效的风险减轻措施。
2、对于暂未申报的品种，首先应进行风险评估，若经评估不会产生亚硝胺杂质，则递交风险评估报告；若经评估可能会产生亚硝胺杂质，则进行确认性检测，根据检测结果选择常规检测、跳检或免检。
二、 限度制定：
1、单个N-亚硝胺杂质限度制定：
a）特定的N-亚硝胺杂质根据官方公布的每日可接受摄入量（AI）计算限度，如DNMA、NDEA等（详见表1，数据来源：EMA亚硝胺杂质控制问答）；
b）无官方限度，有TD50数据的，根据TD50计算每日可接受摄入量（TD50（mg/kg/day）×50kg/50000）（详见ICH M7）；
c）无官方限度、无TD50数据的，可按亚硝胺类特定的TTC 18ng/天计算；
▲ 表1 特定N-亚硝胺每日可接受摄入量
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名称
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AI（ng/day）
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N-亚硝胺二甲胺，NDMA(62-75-9)
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96.0
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N-亚硝基二乙胺，NDEA(55-18-5)
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26.5
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N-亚硝基乙基异丙胺，EIPNA(16339-04-1)
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26.5
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N-亚硝基二异丙胺，DIPNA(601-77-4)
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26.5
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N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸，NMBA(61445-55-4)
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96.0
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1-甲基-4-亚硝基哌嗪，MeNP(16339-07-4)
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26.5
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N-亚硝基二正丁胺，NDBA(924-16-3)
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26.5
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N-亚硝基-N-甲基苯胺，NMPA(614-00-6)
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34.3
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N-亚硝基吗啉，NMOR(59-89-2)
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127
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N-亚硝基伐尼克兰，NNV
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37.0
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N-亚硝基二丙胺，NDPA(621-64-7)
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26.5
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N-亚硝基哌甲酯，NMPH(55557-03-4)
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1300
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N-亚硝基哌啶(100-75-4)
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1300
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N-亚硝基雷沙吉兰
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18
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7-亚硝基-3-（三氟甲基）-5,6,7,8-四氢[1,2,4]三唑-[4,3-a]吡嗪
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37
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N-亚硝基-1,2,3,6-四氢吡啶，NTHP(55556-92-8)
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37
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N-亚硝基去甲替林
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8
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N-甲基-N-亚硝基苯乙胺，NMPEA(13256-11-6)
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8
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N-亚硝基达比加群
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18
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4-（甲基亚硝基氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）
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100
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N-亚硝基度洛西汀
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100
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N-亚硝基氟西汀
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100
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N-亚硝基帕罗西汀
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1300
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N-亚硝基二苯胺，NDPh(86-30-6)
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78000
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N-亚硝基甲芬那酸
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78000
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N-亚硝基吡咯烷，NPYR(930-55-2)
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1700
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N-亚硝基二乙醇胺，NDELA(1116-54-7)
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1900
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2、含有一种以上N-亚硝胺杂质的产品限度制定：
a）N-亚硝胺含量低于其各自限度的10%时，在计算单个或总N-亚硝胺的限度时无需考虑，但工艺和控制设计时应尽可能防止或减少产生N-亚硝胺杂质；
b）从检出量≥10%限度的N-亚硝胺杂质中选择最低的限度作为总N-亚硝胺的限度；
c）每种N-亚硝胺杂质的限度设定为其限度的一定百分比，所有百分比之和不超过100%，如某原料每日可接受摄入量为10mg，NDMA、NDEA、NDPA检出量均大于其限度的10%，按三种杂质单独的限度为9.6ppm、2.65ppm、2.65ppm，则可设置上述三种杂质的限度分别为4.8ppm（50%）、0.79ppm（30%）、0.53ppm（20%）。此时无需设置总N-亚硝胺限度。
d）单个N-亚硝胺的限度按上文中提到的方案制定，同时制定总杂，所有N-亚硝胺的检出量与其限度的百分比之和不得超过100%。如上例中，NDMA、NDEA、NDPA实际检出量分别为4.8ppm（50%）、0.79ppm（30%）、0.53ppm（20%），三者百分比值和不超过100%，符合要求，若NDMA检出量为5.76ppm（60%），三者百分比之和超过100%，则不符合要求。
3、其他情况：
a）当在治疗剂量下API本身具有显著的致突变性/致染色体断裂性风险时，控制N-亚硝胺限度应不大于ICH Q3A/B的界定限。
b）适用于ICH S9指南范围内定义的晚期癌症的产品，控制N-亚硝胺限度应不大于ICH Q3A/B的界定限。
c）“短于寿命”(LTL)方法只能在与主管当局协商后作为临时措施考虑，直到可以采取进一步措施将N-亚硝胺杂质减少至以上提到的限度以下。
三、 N-亚硝胺杂质的控制方式：
N-亚硝胺杂质一般或推荐在成品中控制，但如果确定了杂质的来源，也可以采用ICH M7指南中所述的控制方法1-3进行控制。N-亚硝胺杂质的控制方式主要有以下3种方式：
1、常规检测；
2、免检：至少6个中试规模批次或3个生产规模批次的检测结果均低于限度的10%；
3、跳检：至少6个中试规模批次或3个生产规模批次的检测结果均低于限度的30%。
需要注意的是，3种控制方式对分析方法的灵敏度具有不同的要求：
1、常规检测时，LOQ应≤杂质限度；
2、免检时，LOQ应≤10%限度；
3、跳检时，LOQ应≤30%限度。
因此，如果样品中N-亚硝胺杂质检出量低于10%限度，想要免检时，对应的分析方法应有足够的灵敏度。
四、 总结
N-亚硝胺化合物是一类被ICH M7列为“关注队列”的杂质，该类化合物存在较高的致癌风险，已成为制药行业和全球监管机构的关注问题。N-亚硝胺化合物产生原因较多，主要有工艺产生（如在同一工艺步骤使用了能引入仲胺和亚硝化试剂的物料等）、降解产生（如雷尼替丁在高温下会产生亚硝胺类杂质等）、污染引入（如使用了回收的DMF、邻二甲苯等）等产生途径。制药企业应积极配合监管机构，制定有效的控制措施，以消除或减少患者药品中可接触的N-亚硝胺杂质的水平，确保上市药物的持续安全性和质量可控制性。
参考文献：
1、Dobo KL, Kenyon MO, Dirat O, Engel M, Fleetwood A, Martin M, Mattano S, Musso A, McWilliams JC, Papanikolaou A, Parris P, Whritenour J, Yu S, Kalgutkar AS 2022. Practical and Science-Based Strategy for Establishing Acceptable Intakes for Drug Product N-Nitrosamine Impurities. Chemical Research in Toxicology 35(3):475-489.
2、EMA Questions and answers for marketing authorisation holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5(3) of Regulation (EC) No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal products.
3、FDA Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs（Guidance for Industry）。
