为了全面评估候选药与参照药的生物活性和功能活性相似性，应开展体外比对试验。
生物类似药和创新生物药的体外药效试验的试验方法基本相同，但由于生物类似药的体外药效比对试验强调比较候选药与参照药的相似性，而非仅是评价候选药的生物活性和功能活性，体外药效比对试验应敏感、特异且具有足够的分辨力，应能科学有效地评估候选药与参照药的已知和未知的质量属性差异是否具有临床相关性。在考虑和设计体外药效比对试验时，应充分调研参照药的作用机制，查阅参照药已开展的体外药效试验种类和试验数据。根据调研结果，设计比对试验检测与药物作用机制相关的各项药物生物活性和功能活性。设计体外药效比对试验应重点考虑以下内容。
一、需测试的生物活性和功能活性
根据生物药的结构特点和发挥作用的方式，体外药效比对试验一般包含以下内容：
结合试验 包括与靶点的结合;与相关Fc受体(FcR，如FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγRⅢ)、新生儿Fc受体(neonatal Fcreceptor)和补体1q(complement 1q，C1q)的结合。
生物活性和功能性试验 包括Fab相关功能(如可溶性配体的中和作用、受体激活或阻断、通过激活膜结合抗原逆转下游信号)和Fc相关功能[如ADCC、抗体依赖细胞介导的吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis，ADCP)以及CDC]。
在评估是否相似时，功能性试验结果的权重更高。
二、试验药物的选择
参照药应尽可能选择来自候选药拟申报的国家或地区的药品。若候选药拟在多个国家或地区申报，应按监管机构要求选择来自拟申报地的参照药进行试验;候选药应为生产工艺确定后生产的产品，最好为商业化工艺生产的产品。
应采用多批次的参照药和候选药进行体外药效比对试验，参照药和候选药的批次间质量属性和试验的变异性将影响试验中需测试的药物批次数量，测试的药物批次数量应足够说明候选药和参照药的相似性或差异性。
三、组别和剂量设计
通常包含对照组(或同型抗体对照组、溶媒对照组)、候选药组和参照药组。试验应比较候选药与参照药的浓度-药理活性关系，拟测试的浓度范围应覆盖可检测出候选药与参照药潜在差异的最敏感浓度范围。
四、试验结果分析
试验结果的相似性评价方法可参考质量分析比对试验采用的方法，即根据药物的作用机制，将测试的体外药效指标(关键质量属性)进行风险分级。质量风险等级(tier)为1、2和3级的测试指标，分别采用统计学等效性检验、候选药是否在参照药的区间(即平均值±3倍标准偏差)范围内和直接目视比较数据来判断候选药和参照药的相似性。
体外药效比对试验通常引用质量分析中生物活性比对试验数据。此外，由于体外药效比对试验比整体动物比对试验能更加特异和灵敏地检测出候选药与参照药的差异，体外药效/生物活性比对试验在生物类似药的非临床相似性评价中至关重要。
