1. 背景介绍
方法验证的目的是验证方法可以符合预期使用的目的。溶出度方法验证，即验证该溶出度方法可以准确有效的对固体制剂如片剂、胶囊剂、缓释制剂或者透皮贴剂等溶出情况进行检测和定量。按照ICH Q2（R1）分析方法论证：正文和方法学和中国药典9101分析方法验证指导原则，溶出度方法验证需要对以下指标进行验证：专属性，线性，范围、准确度、精密度（重复性、中间精密度）、定量限（缓释制剂和控释制剂可能使用）、耐用性和系统适用性试验。以上验证指标的标准均满足要求则方法验证通过，也就是符合预期使用的目的。那标准如何设定？本文将对各指标的标准制定进行讨论，本文内容为笔者经验之谈，如有不正确的地方，还请各位同仁予以指正。
2. 溶出度方法验证指标标准的制定
2.1. 耐用性
耐用性的研究更有助于判断对检测结果存在影响的关键条件，在方法开发中应尽可能多的积累相关的知识。
溶出度方法的耐用性可以分为两个部分，分别是溶出仪和HPLC。溶出仪可能需要研究的参数包括转速，溶出介质的体积，组成以及pH，温度，取样时间，取样方式等。HPLC可能需要研究的参数包括，流速，柱温，流动相组成以及pH等条件。
其中对于取样方式需要进行强调，因为自动取样涉及到管路的润洗，还可能存在在线过滤，所以与手动取样还是存在较大的区别，因此一样要进行研究，如果结果不一致，应当在文件中进行规定使用哪种方式进行取样。取样时还涉及到样品溶液的过滤，对不同类型的滤膜进行筛选，已确定合适的滤膜没有明显的吸附，尤其对于规格较小的产品。与正常样品相比较，耐用性样品的结果的差异应不超过2%。
溶出度样品的检测可能使用HPLC或者UV，因为UV相对较简单，此处不再进行阐述。对于HPLC，因为溶出度仅含有主成分，所以检测溶出度HPLC方法的系统适用性相对较为简单，可直接参照含量测定，拖尾因子应在0.8-1.8之间，以限制拖尾或者前延的情况对定量造成影响。
耐用性还应进行溶液稳定性研究，因为片固体制剂存在多规格的情况，所以需要对高低浓度的对照溶液和样品溶液分别进行研究，与初始的峰面积差异应不超过2%。因为溶出度试验量非常巨大，强烈建议把对照溶液的稳定性时间做的长一些，每次不用再重新制备对照溶液，还能节省很多对照品。
2.2. 过滤研究
固体制剂在溶出介质释放过程中，可能会存在部分没有完全溶解的原料药颗粒，取样后会继续溶解，导致该样品的结果偏高，为了避免该问题的发生，所以应对样品进行过滤处理，建议采用在线过滤的方式，相较于在线过滤，离线过滤具有滞后性，如果未能及时进行过滤，仍可能对结果产生一定的影响。因为在不同时间从同一溶出杯中取出的样品，溶出度结果可能存在微量的差异，所以过滤研究的时候，我们应尽可能一次性的多取出一些样品，例如50ml或者100ml，混匀后，用适合的滤膜进行过滤，如果滤膜存在较强的吸附，尤其是低规格的制剂，此时则应考察不同材质的滤膜，以寻找到适宜的滤膜。
2.3. 专属性
专属性考察稀释剂和辅料溶液的干扰，要求溶出介质，辅料溶液不存在干扰。胶囊应注意增加胶囊壳的研究，肠溶制剂应当进行酸碱两个阶段辅料溶液的干扰情况。
2.4. 定量限
定量限为当下方法能够满足定量的最低限度，因为缓释制剂和控释制剂的第一个时间的结果通常比较低，所以该时间点的溶出度可以被准备定量，建议对方法的定量限进行研究，尤其是在规格较小的情况下。定量限要求信噪比不低于10。定量限并不是所有类型的固体制剂都需要研究，仅在初始时间点溶出度较低的情况下，为了证明方法具有足够的灵敏度，可以准确定量时进行考察。
2.5. 线性与范围
溶出度的研究范围应从定量限或者最小规格的第一个时间点的溶出度至最大规格的最后一个时间点溶出度+30%或者更高，要求相关系数应不小于0.995，y轴截距不大于100%浓度水平峰面积的2%。如果不同规格之间对照溶液浓度不同，需要选择对应的100%浓度水平峰面积计算y轴偏差%。线性贮备溶液制备溶液时，可以添加适量的有机溶剂，但要保证最终的线性溶液中有机溶剂的占比不超过5%。
2.6. 精密度
对于普通固体制剂之间，不同溶出杯之间的溶出度差异相对较小，可以评估6杯溶出度的RSD%，但对于缓控释制剂来说，不同杯之间结果相差较大，建议对同一杯中最后时间点取6份，测定RSD%，应不大于2.0%。中间精密度应当考察不同的人员，在不同时间，不同溶出仪（最好是不同品牌）以及不同HPLC进行考察，要求可以考察f2，不小于50，如果为单点，重复性与中间精密度的差异应不大于5%。
2.7. 准确度
溶出度的准确度研究，可以选择在溶出仪或者容量瓶超声中进行研究。最终的目的是保证在有辅料存在的情况下，主成分可以完全溶解到固定量的溶出介质中，即主成分可以被准确的回收回来。准确度研究要分为低，中和高3个水平，以保证溶出度在各水平测得结果的有效性。低水平应当低于第一个时间点的溶出量，高水平应高于最终时间点的溶出量。对于存在多种介质的情况，应当对不同介质分别进行准确度研究。准确度应在95-105%之间。如果部分辅料存在抱团现象，可以加入一定量的有机溶剂使其分散，但应保证有机溶剂在最终溶出介质中占比不超过5%。
3. 结论
从CDE审评尺度来看，不仅要进行主介质的溶出度方法验证，对于不同pH值溶出曲线的方法也要进行适当的验证，根据笔者的经验不同pH值溶出方法的验证可以适当缩减，例如可以不再进行耐用性的研究，而对于国外市场并不要求不同pH值溶出方法的验证。溶出度方法的验证相对来说，较为简单，难点主要在于辅料对准确度的影响，低规格样品的滤膜的筛选，在方法开发的时候，应尽可能对这两方面进行着重的研究。在不同pH值溶出曲线中可能还会遇到以下情形：样品再某种介质中可能不稳定，可以考虑对降解产物进行折算的方式进行溶出度考察。溶出样品取样后从37℃放到室温会存在析出，可以将HPLC样品仓控制为37℃，取样后尽快转移至样品仓中。最后，望本文对您有所帮助。
参考文献：
1. ICH Q2（R1）分析方法论证：正文和方法学
2. 中国药典9101分析方法验证指导原则
3. USP<1092>溶出度分析方法开发与验证
4. 仿制药溶出度质量标准的建立，李飞，中国新药杂志
