环氧乙烷（Ethylene Oxide）不损害灭菌的物品且穿透力很强，故多数不宜用一般方法灭菌的物品均可用环氧乙烷消毒和灭菌。例如，电子仪器、光学仪器、医疗器械、皮毛、棉、化纤、塑料制品、内镜、透析器和一次性使用的诊疗用品等，环氧乙烷是目前最主要的低温灭菌方法之一 ；欢迎各位与小编交流行业内话题，相互学习，共同进步！

1、背景介绍

许多方法适用于环氧乙烷浸提液的定量分析，已有许多关于极限浸提后用气相色谱测定EO的方法，可能还有很多未发表的测定EO残留量的方法。由于医疗器械种类繁多，已发表的方法不一定适用于所有的器械。因此，任何分析可靠的方法，并符合GB/T 16886.7-2015所述的性能准则都可以使用。“分析可靠性”是指当对有特定EO含量的器械进行测定，以便分析是否符合4.3章节所给出的残留限量时，所选择的分析方法具有足够的准确度、精密度、选择性，线性,耐用性和灵敏性，且适合于所要分析的器械。

通过文献评审已经获得了许多用来评定EO残留量水平的分析方法，要想更详细地讨论每一种方法，最好参考方法的原文；本文主要描述气相色谱法对EO残留定量分析方法确认准则进行详细的介绍，EO残留检测方法可参照GB/T 14233.1-2022章节9部分--气相色谱法；

2、确认气相色谱法的准则

一：准确度

定义：准确度是用该方法测定的结果与真实值的接近程度，一般用回收率表示，即测量值占可接受值或真值的百分比来表示。这需要把试验方法的测量值与一已知数值进行比较，已知数值可通过已知纯度被测物质或加标样品得出；

加标样品作为确定准确度的方法，是在样品中加入已知量的被分析物，用百分回收率表示。然而，由于EO易挥发，用这一方法很难确定准确度，建议另选市售有证的标准物。这样，准确度的测量就变成测量的平均值除以可接受的真值，并给出置信区间。回收率(%)按以下公式计算：

R=R0x100% /a或t

式中R：回收率%；R0：测量结果；a或t：可接受值或真值；

要点：准确度测定应在规定的范围内宜至少用3个浓度水平的9个测定结果进行评定(每个浓度分别制备3份）；

举例分析如下：

首先需要绘制EO浓度标准曲线方程，用贮备液配制1μg/mL~20μg/mL至少5个系列浓度的标准溶液，精确量取5mL,置20mL萃取容器中，密封，恒温(60 ℃士1℃)中平衡 40 min。用进样器依次从平衡后的标准样迅速取上部气体,注入进样室,记录环氧乙烷的峰高(或面积)。绘出标准曲线(X:环氧乙烷质量浓度,μg/mL;Y:峰高或面积)。下表一为举例设置参数获得的EO标准溶液浓度与对应的平均峰面积数据，下图一为EO标准曲线线性拟合图；

表1，EO浓度与平均峰面积数据

图1，EO标准曲线线性拟合图

判定依据：以上标准曲线最小相关系数为0.9996＞0.95，符合标准要求；

得出EO标准曲线线性拟合方程后，在曲线方程的范围内选取3个EO标准浓度水平的9个测定结果进行准确度的评定，如下表2所示选取的EO浓度测定的结果数据所示：

表2，EO浓度与平均峰面积数据

判定依据：EO相对标准差百分率(RSD)在所使用标准曲线范围内宜不超过5%，根据药典要求，该EO浓度范围内的回收率在85%~115%即可，综合结果为符合标准要求；

二：精密度

定义：精密度是指在相同的分析条件下，多次测定结果之间的接近程度。精密度包括三部分：重复性、中间精密度和再现性；以下就这三个方面内容详细展开介绍：

1-重复性

在规定标准物使用范围内，至少用9个测定结果来评定重复性(即3个不同浓度平行制备3份)；上面准确度的数据可用来评定重复性；常用以下两种方法进行重复性的测量：一是EO的相对标准差百分率(RSD)在所使用标准曲线范围内宜不超过5%，上述准确度测试表2中的RSD为EO检测含量对应的相对标准偏差；二是峰面积的相对标准差(变异系数)来计算重复性，计算得出峰面积的RSD分别为：2.33%、1.03%、1.71%，符合标准要求；

2-中间精密度

中间精密度可通过确定随机事件对分析过程精密度的影响来评定，随机事件例如包括日期、分析人员、设备等。不需对这些事件单独研究，鼓励使用(矩阵)实验设计。按以上得到的准确度数据，建议至少用两个独立事件来指示试验方法的中间精密度。宜报告标准差、相对标准差(变异系数)和置信区间，

以下小编以不同时间和不同人员对3种不同EO浓度进行测量来评估中间精密度的原理，如下所述：

情景一：张三在2024.05.10对EO浓度2ug/ml、6ug/ml、15ug/ml各进行三次检测试验；得出的检测数据如下表3所示：

表3，张三在2024.05.10对3种不同EO浓度检测数据汇总

从数据上可以看出RSD＜5%，回收率在85%~115%，符合要求；

情景二：李四在2024.05.20对EO浓度2ug/ml、6ug/ml、15ug/ml各进行三次检测试验；得出的检测数据如下表4所示：

表4，李四在2024.05.20对3种不同EO浓度检测数据汇总

从数据上可以看出RSD＜5%，回收率在85%~115%，符合要求；

综合以上两种情景来看，该验证的中间精密度符合要求；

3-耐用性/再现性

分析方法的耐用性是相同的样品在不同的条件下测定结果的再现性程度，不同的条件包括：不同的实验室、不同的分析人员、不同的仪器、不同的试剂批、不同的分析用时、不同的试验温度、不同日期等耐用性通常表示为分析方法的结果不受试验操作和试验环境因素变化的影响，是指在正常预期的不同条件下,不同实验室和不同分析人员的试验结果再现性的一种程度。由于实验室在引进新的色谱柱或新方法时要进行方法确认,这种确认可以结合不同的分析者、不同的日目期、不同的仪器等来进行。如果已经完成了中间精密度评定，一般不再进行再现性实验，这里不展开举例进行阐述；实验室间的研究比较对本部分来说并不重要；

三：线性

线性是用来测量方法响应与被测物质浓度的相关性。线性宜根据所使用标准物质的范围来确定宜至少使用5种浓度进行标准浓度对峰面积或峰高的回归分析，分析人员宜确定校准数据的线性以及斜率和截距的再现性。标准曲线的最小相关系数宜为0.95；

以下小编以同一人员在不同时间对EO标准曲线线性拟合图进行线性比比比较，如下所述：

情景如下：张三在2024.06.01绘制了一条EO标准曲线1，在2024.06.10绘制了一条EO标准曲线2，如下数据所述：

表5，EO浓度与平均峰面积数据

图2，EO标准曲线线性拟合图1

表6，EO浓度与平均峰面积数据

图3，EO标准曲线线性拟合图2

从以上两条EO标准曲线方程中可以看出标准曲线的最小相关系数R²＞0.95，满足标准要求；

四：方法检出限（MDL）

方法检出限是具有适宜置信度所能检出的最低量。检出限可通过分析已知浓度的被测物并确定能被可靠检测出的最低水平来确定。

有多种方法确定方法检出限,下列方法以外的方法也可能是可接受的。具体测试方法见GB/T 16886.7-2015-B2.5章节；

五：定量限（QL）

定量限是用已知浓度的被测物确定的、具有可接受的准确度和精密度所能定量测定的最低水平有多种方法确定定量限,下列方法以外的方法也可能是可接受的；具体测试方法见GB/T 16886.7-2015-B2.6章节。

结语

以上内容小编基于数据的假设阐述EO残留测试方法学验证要点，实际做该方法学验证时需要具体分析测试数据并得出合理的结论。