摘 要： 建立了高效液相色谱-质谱法同时测定退热贴中13种解热镇痛类化学药物。样品用5 mmol/L甲酸铵溶液（含0.1%的甲酸）-甲醇溶液（体积比为1∶1）提取，经Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）梯度洗脱分离，采用电喷雾离子源，多反应监测模式进行检测，以色谱峰面积外标法进行定量。13种化合物的质量浓度在各自浓度范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.995～0.999 6，方法检出限为0.12～2.5 μg/kg，定量限为0.32～8.2 μg/kg；基质空白加入不同浓度水平的加标回收率为93.9%～102.0%，测定结果的相对标准偏差为2.31%～4.81%（n=6）。该方法基质干扰小、准确、可靠，适用于退热贴中解热镇痛类化学药非法添加的测定。

关键词： 退热贴； 解热镇痛； 非法添加； 高效液相色谱-质谱法

 

 

退热贴又名退烧贴、降温贴、冷敷贴，是一类由纯化水、甘油、冰片、薄荷、高分子凝胶等组成的用于退热降温的贴剂类医疗器械。它还具有提神醒脑，缓解感冒引起的发烧、头痛、牙痛、肌肉扭伤、日晒所致疼热症状，最常用于儿童发烧［1‒2］。

解热镇痛化学药品是一类不仅能镇痛还能降温的药物，是临床常用的药物［3‒7］。常用的解热镇痛药有以阿司匹林为代表的水杨酸类［8］，以对乙酰氨基酚为代表的苯胺类［9］，以吲哚美辛为代表的吲哚衍生类，以布洛芬为代表的丙酸类［10］，以保泰松为代表的吡格酮类等。滥用应用解热镇痛类的化学药品，可产生显著的副作用和不良反应，如腹部不适，恶心呕吐，皮肤瘙痒，血液系统出现贫血、凝血障碍，神经系统出现头晕等［11‒13］，因此该类药物的使用和用量都需严格遵从医嘱，不得滥用。若发烧病人在吃完解热镇痛类的药物后再使用添加解热镇痛类药物的退烧贴，将超过安全用药剂量，造成严重不良反应，影响病人的健康。

为了进一步保障用药安全，对退热贴中解热镇痛类化学药品非法添加的测定研究十分必要。高效液相色谱法［14］及毛细管电色谱法［15］具有环保、高效等优点在解热镇痛类药物的分析上得到广泛应用，但由于该类方法定性差，且在定量时样品基质易产生干扰，故对多个化合物的同时测定难度较大。高效液相色谱-质谱法［3-5，16-17］具有分析速度快、选择性强，灵敏度高，能够准确定性定量等优点，更适用于复杂样品的高通量快速筛查。笔者建立了高效液相色谱-质谱法快速筛查退热贴中13种加解热镇痛类化学药品，并首次对市场上的退热贴非法添加解热镇痛类化学药品进行筛查评估，为市场用药及器械的使用安全提供更有利的技术支持。

 

 

1、 实验部分

 

 

1.1 主要仪器与试剂

超高效液相色谱串联质谱仪：AB SCIEX 4000 QTRAP型，美国AB SCIEX公司。

电子天平：（1）ME204E型，感量为0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司；（2）SQP型，感量为0.01 mg，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。

数控超声波清洗器：KQ3200DE型，昆山市超声仪器有限公司。

布洛芬、对乙酰氨基酚、阿司匹林、双氯芬酸钠、吲哚美辛、萘普生、氨基比林、芬布芬、安替比林、罗通定、尼美舒利、酮洛芬、异丙安替比林对照品：纯度（质量分数）均大于99%，中国食品药品检定研究院。

甲醇：色谱纯，美国赛默飞世尔科技公司。

乙腈：色谱纯，德国默克公司。

甲酸铵：色谱纯，上海麦克林生化科技股份有限公司。

甲酸：色谱纯，美国ACS恩科化学公司。

氮气：纯度（体积分数）为99.9%，南昌市江竹化工气体有限公司。

退热贴样品：市售。

实验室用水均为超纯水。

1.2 仪器工作条件

1.2.1 色谱仪

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm，美国沃特世科技有限公司）；流动相：A相为含0.1%甲酸的5 mmol/L甲酸铵溶液，B相为甲醇；洗脱方式：梯度洗脱；洗脱程序：0～2 min时A相体积分数为90%，2～3.5 min时A相体积分数由90%变为10%，3.5～6.5 min时A相体积分数保持为10%，6.5～6.6 min时A相体积分数由10%变为90%，6.6～10 min时A相体积分数保持为90%；流动相流量：1.0 mL/min；检测温度：30 ℃；进样体积：5 μL。

1.2.2 质谱条件

电离方式：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：多反应监测模式（MRM）。离子源喷雾电压：正离子模式（ESI+）为5.5 kV，负离子模式（ESI-）为-4.5 kV；气帘气压力：0.24 MPa；喷雾器压力：0.31 MPa；辅助加热气压力：0.34 MPa；碰撞气压力：0.06 MPa；离子源温度：550 ℃。13种化合物的母离子、子离子、去簇电压及碰撞电压等参数见表1。

表1   13种化合物的质谱分析参数

Tab. 1   Mass spectrometric determination parameters of 13 compounds

注：带*的表示为定量离子

 

1.3 溶液制备

对照品储备液：分别精密称取布洛芬、对乙酰氨基酚、阿司匹林、双氯芬酸钠、吲哚美辛、萘普生、氨基比林、芬布芬、安替比林、罗通定、尼美舒利、酮洛芬、异丙安替比林对照品约10 mg，分置于13只100 mL容量瓶中，分别加入甲醇，超声溶解并定容，各对照品的质量浓度均为0.1 mg/mL。

混合对照品溶液：分别取13种对照品储备液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇，定容至标线，摇匀，其中各组分质量浓度均为10 μg/mL。

系列混合标准工作溶液：分别量取适量的混合对照品溶液，用含0.1%甲酸的5 mmol/L甲酸铵溶液与甲醇（体积比为1∶1）混合溶液（以下简称甲酸铵-甲醇混合溶液）稀释，制成质量浓度分别为5、10、20、50、80、100 ng/mL的系列混合标准工作溶液。

样品溶液：用剪刀将退热贴样品剪成小于0.5 cm×0.5 cm的小块样品，精密称取1.00 g样品，置于50 mL离心管中，加入甲酸铵-甲醇混合溶液30 mL，超声30分钟，再用甲酸铵-甲醇混合溶液定容至标线，摇匀，过滤。

1.4 定量方法

按1.2仪器工作条件测定样品溶液曲线法计算出各化合物的含量。

 

2、 结果与讨论

 

2.1 样品提取条件的优化

退热贴的组成相对简单，空白基质产生的基质效应对实验的影响较小，故只对提取溶剂进行了优化。因所需检验的成分均溶于甲醇，故选择甲醇和甲酸铵-甲醇混合溶液作为提取溶剂，并进行比较，实验发现使用甲酸铵-甲醇混合溶液提取所得的样品溶液中各色谱峰峰型更好且信号更强。

2.2 质谱条件的优化

根据13种化合物的结构特点，在参阅文献9和11后，阿司匹林、布洛芬以及尼美舒利选择了电喷雾源正离子模式（ESI-），其他10个化合物采用电喷雾源正离子模式（ESI+），均进行多反应监测方式（MRM）进行试验。

值得注意的是，其中双氯芬酸钠在溶液中呈去钠加氢的方式进行电离的，故在确认母离子时选择的质荷比为296.1。而阿司匹林在负离子模式下呈去羧基的方式进行电离，故选择质荷比为137.1的碎片离子作为母离子。

2.3 液相色谱条件的优化

因样品中含有甲醇，为了减小效溶剂效应，分别选用水-甲醇、0.1%甲酸溶液-甲醇、甲酸铵-甲醇混合溶液三组流动相，进行梯度洗脱进行比较试验，结果表明，甲酸铵-甲醇混合溶液得到的色谱峰峰型更好，灵敏度更高，具体优化的梯度条件见1.2.1，所得各色谱峰的定量离子图见图1。

图1   13种化合物定量离子色谱图

Fig. 1   Quantitative ion chromatograms of 13 compounds

2.4 线性方程、检出限与定量限

精密量取混合标准工作溶液，按1.2色谱条件测定，以各成分质量浓度（x）为横坐标，以色谱峰面积（y）为纵坐标，绘制标准工作曲线，计算线性方程和相关系数。将混合对照品溶液用甲酸铵-甲醇混合溶液逐级稀释，按1.2色谱条件进行测定，以3倍信噪比对应的质量浓度为检出限，以10倍信噪比对应的质量浓度为定量限。

13种化合物的质量浓度在5.070～108.8 μg/L范围内与色谱峰面积线性关系良好，线性方程、相关系数、检出限、定量限见表2。

表2   13种化合物质量浓度线性范围、线性方程、相关系数及检出限、定量限

Tab. 2   Linear range，linear equation，correlation coefficient，detection limit, and quantification limit of 13 compound

 

2.5 加标回收与精密度试验

分别取阴性退热贴样品各1.0 g，置于12支50 mL离心管中，其中6份分别加入0.05 mL混合对照品溶液，另外6份分别加入0.4 mL混合对照品溶液，按样品溶液处理方法进行加标样品制备，照1.2色谱条件分别进行测定，测定结果见表3。由表3可知，13种化合物平均回收率为93.9%～102.0%，测定结果的相对标准偏差为2.31%～4.81%，表明该方法重复性好，准确度高。

表3   加标回收试验结果

Tab. 3   Results of recovery test

 

3、 结语

 

 

建立了13种解热镇痛类化合物的高效液相色谱-质谱法，并首次用于测定退热贴。该方法准确度高，重现性好，具有简单、快速、高效等优点。该研究为建立退热贴的检验标准奠定了一定的基础，对提升我国退热贴的安全监管具有重要意义。

 

 

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引用本文： 傅小红，陈思，姜伟，等 . 高效液相色谱-质谱法同时测定退热贴中13种解热镇痛类化学药物［J］. 化学分析计量，2024，33（6）：34. (FU Xiaohong, CHEN Si, JIANG Wei, et al. Simultaneous determination of 13 antipyretic and analgesic chemical drugs in antipyretic patches by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(6): 34.)