我们的分析对象往往不是中性物质，这就意味着流动相的pH会对我们的分离情况具有一定的影响。下面就让我们一起来了解一下pH究竟如何影响我们的分离情况吧。

1. pH对分析物的离子化状态的影响

分析物在不同的 pH 条件下会处于不同的离子化状态。对于酸性化合物，pH 较低时会以非离子化形式存在，而在较高 pH 下则会解离成阴离子。对于碱性化合物，较高 pH 时会以非离子化形式存在，而在较低 pH 下会解离成阳离子。

非离子化形式的化合物通常更容易被疏水性的反相柱（如C18柱）保留，保留时间较长。

离子化形式的化合物则通常较难被反相柱保留，保留时间较短。

具体表现为：

对于酸性化合物，当流动相的 pH 低于其 pKa 时，它通常是非离子化的，保留时间较长；当 pH 高于其 pKa 时，它是离子化的，保留时间较短。

对于碱性化合物，情况相反，当 pH 高于其 pKa 时，保留时间较长；低于其 pKa 时，保留时间较短。

2. 选择性

改变流动相的 pH 可以调节多种化合物的离子化状态，从而改变它们之间的相对保留行为。这对多组分混合物分离时的选择性影响尤为重要。例如：

通过调整 pH，可能会让一种化合物保持非离子状态，另一个化合物则保持离子状态，从而增强它们的分离效果。

在某些 pH 下，不同化合物的离子化行为差异显著，有助于优化分离。

3. 峰形

不适当的 pH 可能导致峰形变差，尤其是当 pH 靠近化合物的 pKa 值时，部分化合物处于离子化和非离子化形式的混合状态，导致峰形拖尾或展宽。通过选择合适的 pH，可以改善峰形，使得分离效果更好。

4. 流动相和柱的稳定性

pH 对流动相和色谱柱的稳定性也有影响。大多数反相色谱柱（如C18柱）在极端 pH 条件下（非常酸性或非常碱性）会发生降解，因此通常需要在 pH 2到8 的范围内操作。此外，pH 修饰剂如甲酸或醋酸等通常在较中性或略酸性条件下使用，保持质谱等检测设备的兼容性。