定量核磁技术（Quantitative Nuclear Magnetic，简称qNMR)在药品研发和药品质量控制中具有独特的优势，相较于色谱法、光谱法，定量核磁技术在进行药物活性成分的含量测定时不需要自身标准品，复杂基质无需分离。而对比传统的物料平衡法，定量核磁检测更加快速、所需样品量小、专属性强且能做到样品无损。

1、 定量核磁原理与应用

定量核磁技术（Quantitative Nuclear Magnetic，简称QNMR)主要是基于1H-NMR，待测化合物1H-NMR谱上各信号峰强度之比等于相应的质子数之比，确定氢的积分值与其摩尔浓度成正比，定量核磁方法分为相对定量法和绝对定量法。相对定量法是QNMR中最简单的，通过比较2种或2种以上成分特征峰的峰面积来确定含量；绝对定量法是以结构和含量已知的化合物为参照，与待测物制成溶液进行测定，通过比较两者的信号积分强度来确定待测物的含量，绝对定量法根据实验方法不同又分为内标法、外标法和标准加入法。

定量核磁技术在药学领域的应用有以下方面：

▲反应过程监测

▲对照品赋值

▲原料药含量测定

▲药物制剂的含量测定

▲药物的杂质检查

▲化合物纯度检查

▲多组分纯度确定

▲代谢组学研究

▲聚合物组成研究等。

2、 药典法规要求

2010版中国药典二部附录中首次提到核磁共振波普法，2020版改为四部通则0441核磁共振波谱法。USP现行版、EP 10.8版、JP第18版和中国药典2020年版的NMR法通则内容对比如下表所示。中国药典2020年版0441通则包括原理、NMR仪、核磁共振谱、测定方法四部分。定量分析中提供了绝对定量模式和相对定量模式的供试品溶液制备方法、测定方法和计算公式，并简要例举了需要注意的实验参数的设置及优化项目。

3、 定量核磁方法开发思路

①氘代试剂

▲待测物及内标物在所选气代试剂中完全溶解;

▲关注待测物性质，不与气代试剂发生反应;

▲必要时可加入重水或TFA移除水峰干扰。

②内标物的选择

▲内标物的选择由待测物出峰情况确定;

▲内标物定量峰与待测物出峰不重叠;

▲关注内标物化学性质，不与待测物反应A内标物样品性质稳定，定量峰峰型简单。

③定量峰的选择

▲定量峰与其他信号峰基线分离;

▲定量峰之间靠近，峰型接近，避免基线带来的干扰;

少选芳香区信号峰作为定量峰;A尽量避免卫星峰的干扰。

④样品的前处理

▲为减少称量误差使用精密度高的分析天平称量，同时称量量在10mg以上;

▲如果样品活泼氢较多，可以滴加重水.气代甲醇等试剂去除活泼氢;

▲样品完全溶解是必要的。

⑤采集参数设置

▲扫描次数:保证定量峰的信噪比足够;

▲弛豫延迟:保证重复扫描时信号能够完全弛豫，一般为5倍以上的T1;三角形;

▲脉冲激发:O1P应在待测物和内标物信号频率之间，减少偏共振效应。

⑥实验数据处理

▲手动积分一般较自动积分准确;

▲避免卫星峰以及基线下杂峰的干扰;

▲必要时对基线、峰相位进行矫正，使峰型对称，减少积分误差;

▲内标物和待测物的定量峰积分应较为接近。

⑦误差分析

▲待测物和内标物定量峰响应差距过大;

▲称量误差，最好保证样品称量值大于天平最小称量值的两倍以上;

▲仪器参数的影响，如共振偏移、AQ设置不当RG值设置过小等造成的影响。

⑧交付验收

▲开具相关验收报告;

▲如有需要样品可以回收处理。