摘 要： 建立高效液相色谱测定含有蜂王浆成分化妆品中10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA）的方法。在1.000 g样品中加入8 mL甲醇，超声提取10 min，静置至室温，用甲醇定容至10 mL，以10 000 r/min转速离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，在35 ℃柱温下，采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）进行分离。以甲醇-0.12%磷酸溶液（体积比为55∶45）为流动相进行等度洗脱，流量为1.0 mL/min，进样体积为10 μL，以二极管阵列检测器检测，检测波长为210 nm。10-HDA的质量浓度在0.22～54.19 μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好，相关系数为0.999 9，方法检出限和定量限分别为0.65、2.17 μg/g。样品加标回收率为96.59%～102.09%，测定结果的相对标准偏差为0.43%～1.33%（n=6）。该方法高效，灵敏度高，可用于含蜂王浆成分化妆品中10-HDA的含量检测。

关键词： 化妆品； 蜂王浆； 10-羟基-2-癸烯酸； 高效液相色谱法

随着我国化妆品市场的快速发展和大众消费理念的转变，“天然化妆品”应运而生，并深受消费者的追捧[1]。蜂王浆等天然蜂产品成为化妆品原料的关注热点[2]。

蜂王浆含有大量的氨基酸、维生素、蛋白质等物质，具有提高免疫力、抗感染、调节血糖等功效[3‒4]。此外，蜂王浆富含超氧化物歧化酶、黄酮类化合物和微量元素等辅酶因子，可有效地清除、抑制自由基[5]，还可以通过Akt/mTOR/HIF-1α/NF-κB信号通路促进角质形成细胞增殖，促进、增强皮肤细胞的活力，改善细胞的新陈代谢[6]。同时，蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)可以抑制B16F10黑色素瘤细胞中酪氨酸酶的活性，在动物模型局部使用具有明显的脱色活性[7]。此外，蜂王浆具有保湿，乳化和稳定特性[8]，因此，添加蜂王浆的化妆品具有保湿、抗皱、祛痘抗痤疮和防止色素沉积等功效[9]。蜂王浆作为天然化妆品原料，其市场需求不断扩大。部分化妆品生产厂家在经济利益的驱使下，采用不含蜂王浆的配方生产宣称蜂王浆为主要成分或标注蜂王浆成分的产品，该行为违反了我国《化妆品标识管理规定》，对市场秩序和消费者权益造成不良影响。目前，化妆品中蜂王浆的检测方法尚未有公开报道。

10-HDA是蜂王浆特有的主要脂肪酸，是衡量蜂王浆质量的重要指标，也可用来判定蜂王浆的真伪[10‒11]。目前已有基于银(I)和四甲基联苯胺的比色传感法、超高效液相色谱-串联质谱法测定10-HDA的文献报道[12‒13]。比色传感法简便易操作，适用性广，但基质干扰较大，结果准确度低。超高效液相色谱-串联质谱法具有高分辨率和灵敏度，但检测成本昂贵，对操作者专业水平要求较高。高效液相色谱法作为10-HDA的主要检测方法，广泛应用于测定蜂王浆口服液、脑心舒口服液等药品及保健品中10-HDA的测定[14‒16]。对于化妆品而言，由于其成分复杂，通常包含多种脂类、烃类以及其他添加剂，往往以乳液、膏霜等半流体或半固体形态存在。鉴于这种多样性和复杂性，化妆品中10-HDA的检测仍需要进一步研究。笔者通过对流动相、柱温、提取溶剂、超声时间的比较分析，建立了高效液相色谱法测定含蜂王浆化妆品中10-HDA。该方法为含蜂王浆化妆品的质量检测提供了科学有效的技术手段。

1、 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent 1260 LC型，配二极管阵列检测器，美国安捷伦科技有限公司。

电子天平：AE-240型，感量为0.01 mg/0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多仪器公司。

台式高速离心机：HT16MW-1型，湖南赫西仪器装备有限公司。

智能型数控超声清洗器：KQ-500DE型，昆山市超声仪器有限公司。

10-HDA标准物质：纯度(质量分数)为97.2%，批号为21120829，坛墨质检科技股份有限公司。

甲醇：色谱纯，霍尼韦尔(中国)有限公司。

磷酸、盐酸：均为分析纯，中国医药集团有限公司。

化妆品样品：市售。

1.2 溶液配制

10-HDA标准储备溶液：精密称量10-HDA标准物质11.15 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容至标线，混匀。

10-HDA系列标准工作溶液：精密量取10-HDA标准储备溶液适量，用甲醇配制成质量浓度分别为0.2、0.5、2、5、10、50 μg/mL的系列标准工作溶液。

1.3 色谱条件

色谱柱：MN C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，德国Macherey-Nagel有限责任公司)；柱温：35 ℃；检测器：二极管阵列检测器；流动相：甲醇-0.12%(体积分数，下同)磷酸水溶液(体积比为55∶45)，流量为1.0 mL/min；进样体积：10 μL；检测波长：210 nm。

1.4 样品处理

称取样品1.0 g (精确到0.001 g)，置于具塞比色管中，加入甲醇8 mL，涡旋混匀，超声提取10 min，静置至室温，用甲醇定容至10 mL，摇匀，以10 000 r/min转速离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，取续滤液作为样品溶液。

1.5 实验方法

取10-HDA系列标准工作溶液和样品溶液，按1.3色谱条件测定，根据系列标准工作溶液的色谱峰面积及质量浓度，建立标准工作曲线，采用色谱峰面积外标法计算样品中10-HDA的质量分数。

2、 结果与讨论

2.1 流动相选择

分别以甲醇-0.09%(体积分数，下同)盐酸溶液、乙腈-0.09%盐酸溶液、甲醇-0.12%磷酸溶液为流动相[3,17]，考察10-HDA标准溶液的色谱分离情况。以甲醇-0.12%磷酸溶液和甲醇-0.09%盐酸溶液作为流动相时，10-HDA的色谱峰形尖锐、对称，基线噪声低，干扰小。磷酸与盐酸相比，其毒性低，不易挥发，具有良好的缓冲能力，对色谱柱和其他色谱系统部件的损害较小，因此选择甲醇-0.12%磷酸溶液为流动相。

2.2 柱温选择

在同一条件下，分别设置柱温为30、35、40 ℃，测定10-HDA标准溶液，观察色谱峰分离情况，结果如图2所示。

图2   不同柱温下10-HDA的色谱峰面积

Fig. 2   Chromatographic peak area of 10-HDA at different column temperatures

由图2可以看出，当柱温为35 ℃时，10-HDA的色谱峰面积均高于柱温为30、40 ℃时10-HDA的色谱峰面积，因此选择柱温35 ℃。

2.3 提取溶剂选择

选择加标样品为待测对象，分别以甲醇、甲醇-水、甲醇-0.12%磷酸溶液为提取溶剂，提取样品中的10-HDA，按1.3色谱条件测定，结果如图3所示。由图3可以看出，以甲醇为提取溶剂时，10-HDA的回收率最大(98.5%)，故选择甲醇作为提取溶剂。

图3   不同提取溶剂时10-HDA的回收率

Fig. 3   Recoveries of 10-HDA in different extraction solvents

A—甲醇；B—甲醇-水；C—甲醇-0.12%磷酸溶液

2.4 超声时间选择

以甲醇作为提取溶剂，设置超声时间分别为5、10、20、30 min，测定加标样品中10-HDA的含量。结果显示，超声时间为5、10、20、30 min时，10-HDA的回收率分别为90.3%、98.5%、98.1%、98.6%，表明样品在超声10 min时已经提取完全，故选择超声时间为10 min。

2.5 专属性试验

分别取10-HDA标准工作溶液、样品溶液和加标样品溶液，按1.3色谱条件进行测定。10-HDA的保留时间约为6.7 min，其色谱峰峰形良好，且样品溶液基质无干扰，满足测定要求，表明该方法专属性良好。

2.6 线性方程与检出限、定量限

在1.3色谱条件下，分别测定10-HDA系列标准工作溶液，得10-HDA不同质量浓度标准溶液的色谱峰面积，以质量浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得线性方程y=52 394x-9 601.9，相关系数为0.999 9。结果表明，10-HDA的质量浓度在0.22～54.19 μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好。

精密量取10-HDA标准储备溶液，用甲醇逐步稀释后测定，分别以3倍信噪比和10倍信噪比对应的质量浓度为方法检出限和定量限，根据样品质量和定容体积换算成样品中的含量，以质量分数表示，得检出限为0.65 μg/g，定量限为2.17 μg/g。

2.7 加标回收与精密度试验

准确称取18份样品，各约1.0 g，分别置于具塞比色管中，6份为一组，分别加入10-HDA标准储备溶液25、100、500 μL，制得低、中、高3种浓度水平的加标样品。根据1.4样品处理方法制备加标样品溶液，按1.3色谱条件进行测定，计算10-HDA的回收率和测定结果的相对标准偏差(RSD)，结果见表1。由表1可知，10-HDA的平均回收率为96.71%～102.29%，测定结果的相对标准偏差为0.43%～1.33%，表明该方法准确度和精密度均良好，满足分析要求。

表1   加标回收与精密度试验结果

Tab. 1   Results of the recovery and the precision test

2.8 稳定性试验

选择2.7中10-HDA加标量为21.68 μg的加标样品溶液，分别于第0、2、6、10、24、36、48 h时进行液相色谱分析，结果见表2。由表2可知，色谱峰面积测定结果的相对标准偏差为3.23%，表明加标样品溶液在48 h内稳定性良好。

表2   稳定性试验结果

Tab. 2   Results of the stability test

3、 结语

建立了高效液相色谱法测定化妆品中10-羟基-2-癸烯酸的含量。以甲醇为提取溶剂、甲醇-0.12%磷酸溶液为流动相，利用C18色谱柱分离待测目标物，在210 nm处采集色谱信息。该方法简便、易操作，耗时短，灵敏度高，适用于化妆品中10-HDA的测定，为含蜂王浆成分的化妆品的质量控制提供技术支持。

参考文献：

1 林小峰.国产化妆品行业市场特征及发展策略［J］.广东化工，2023，50（20）：64.

    LIN Xiaofeng. Market characteristics and development strategies of domestic cosmetics industry［J］. Guangdong Chemical Industry，2023，50（20）：64.

2 吴大平，周勇.浅谈蜂产品在化妆品领域的发展前景［J］.中国蜂业，2012，63（21）：64.

    WU Daping，ZHOU Yong. The development prospect of bee products in the field of cosmetics is discussed［J］. Apiculture of China，2012，63（21）：64.

3 YU Xinyu，TU Xinyue，TAO Lingchen，et al. Royal jelly fatty acids：chemical composition，extraction，biological activity，and prospect［J］. Journal of Functional Foods，2023，111：105 868.

4 FALLAH M，NAJAFI F，KAVOOSI G. Proximate analysis，nutritional quality and anti-amylase activity of bee propolis，bee bread and royal jelly［J］. International Journal of Food Science & Technology，2022，57（5）：2 944.

5 SAHIN H. Bee products and their applications in the food and pharmaceutical industries［M］. New York：Academic Press，2022.

6 AKIHIRO A. Royal jelly extract accelerates keratinocyte proliferation，and upregulates laminin α3 and integrin β1 mRNA expression，via Akt/mTOR/HIF-1α pathway［J］. Journal of Cosmetics Dermatological Sciences and Applications，2022，12（2）：83.

7 PENG C C，SUN H T，LIN I P，et al. The functional property of royal jelly 10-hydroxy-2-decenoic acid as a melanogenesis inhibitor［J］. BMC complementary and alternative medicine，2017，17（1）：392.

8 SARI E，MAHIRA K F，PATEL D N，et al. Metabolome analysis and chemical profiling of Indonesian royal jellies as the raw material for cosmetic and bio-supplement products［J］. Heliyon，2021，7（5）：e06 912.

9 王会珍.蜂王浆——天然营养珍品［J］.山东省农业管理干部学院学报，2008，24（2）：165.

    WANG Huizhen. Royal jelly-natural nutrition treasures［J］. The Journal of Shandong Agricultural Administrators' College，2008，24（2）：165.

10 尹欣，乔栋，黎洪霞，等.不同花期蜂王浆主要成分和抗氧化活性分析［J］.食品工业科技，2022，43（17）：291.

    YIN Xin，QIAO Dong，LI Hongxia，et al. Analysis of the main components and antioxidant activity of royal jelly in different flowering periods［J］. Science and Technology of Food Industry，2022，43（17）：291.

11 鲜于运雷，粟诗璇，李珊珊.一种可视化评价蜂王浆质量的方法：CN114002172B［P］. 2023-01-24.

    XIAN Yuyunlei，SU shixuan，LI Shanshan. A method for visual evaluation of royal jelly quality：CN114002172B［P］. 2023-01-24.

12 SU shixuan，LI Shanshan，HU Jing，et al. A colorimetric sensing strategy for detecting 10-hydroxy-2-decenoic acid in royal jelly based on Ag（I）-tetramethylbenzidine［J］. Sensors and Actuators：B. Chemical，2022，354：131 241.

13 胡丽俐，黎瑛，汪辉，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸［J］.食品与机械，2021，37（8）：52.

    HU Lili，LI Ying，WANG Hui，et al. Determination of 10-hydroxy-2-decenoic acid in honey by ultra high performance liquid chromatorgraphy-andem mass spectrometry［J］. Food & Machinery，2021，37（8）：52.

14 KIM E，JANG M，JEONG H，et al. Changes in the chemical composition of royal jelly produced through artificial bee-feeding in response to seasonal variations during non-migratory beekeeping［J］. Journal of Food Composition and Analysis，2023，115：104 982.

15 黄柳霞，陈茹，张琴，等.高效液相色谱法同时测定蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸方法研究［J］.海南师范大学学报（自然科学版），2022，35（4）：407.

    HUANG Liuxia，CHEN Ru，ZHANG Qin，et al. Study on simultaneous determination of 5-Hydroxymethylfurfural and 10-hydroxy-2-decenoic acid in royal jelly oral liquid by HPLC［J］. Journal of Hainan Normal University （Natural Science），2022，35（4）：407.

16 郑艳青，张静，任菲菲，等.脑心舒口服液中蜂王浆的质量分析研究［J］.中国合理用药探索，2017，14（9）：66.

    ZHENG Yanqing，ZHANG Jing，REN Feifei，et al. The analysis of the quality of naoxinshu oral liquid in toyal jelly［J］. Chinese Journal of Rational Drug Use，2017，14（9）：66.

17 于心雨，李珊珊，陶凌晨，等.蜂王浆中脂肪酸标志物检测方法的研究进展［J］.食品工业科技，2023，44（3）：499.

    YU Xinyu，LI Shanshan，TAO Lingchen，et al. Recent advances in determination methods of fatty acid markers in royal jelly［J］. Science and Technology of Food Industry，2023，44（3）：499.

引用本文： 王倩，贾建忠，罗晶 . 高效液相色谱法测定化妆品中10-羟基-2-癸烯酸［J］. 化学分析计量，2024，33（9）：7. (WANG Qian, JIA Jianzhong, LUO Jing. Determination of 10-hydroxy-2-decenoic acid in cosmetics by high performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(9): 7.)