迷迭香纯露，又名迷迭香水，是一种在化妆品和日用化工产品中广泛使用的原料。迷迭香（Rosmarinus officinalis L.）叶和花经蒸馏后冷凝分层，上层为迷迭香精油，下层为迷迭香纯露。迷迭香纯露包含迷迭香叶和花经蒸馏后产生的鞣质、蛋白质、植物糖等水溶性成分，以及迷迭香精油中的部分水溶性芳香有机物和迷迭香酚类天然强抗氧化成分。然而，迷迭香纯露多作为迷迭香精油的副产物进行工业废水排放，不但浪费了资源，还造成了环境污染。迷迭香原产于地中海沿岸，被引进我国后，作为一种经济作物在不少省份广泛种植。迷迭香具有较多品种，且会由于降雨、温湿度、日照、昼夜温差、土壤等气候和环境条件差异，导致迷迭香纯露香型和成分产生差异。因此，有必要开发一种对不同品种、不同产地的迷迭香纯露中的芳香性物质进行定性定量研究的方法，为迷迭香纯露的开发以及推广提供技术支撑。

      目前，迷迭香纯露中微量芳香性物质的定性定量检测研究较少，相关检测方法主要包括直接进样-气相色谱法、萃取浓缩后进样-气相色谱法、气相色谱-嗅觉计法、直接进样-气相色谱-质谱联用法、固相微萃取-气相色谱-质谱联用法、顶空进样-气相色谱-质谱联用法、液相色谱法，定量方法多为面积归一化法，仅能给出各目标物的相对含量。研究人员以气相色谱-质谱联用法分析迷迭香纯露，结合其中有机物的含量以及相关文献，确定以24种代表性芳香性物质作为待测目标物，然后以液液萃取法将目标物浓缩到有机相中，并采用气相色谱-氢火焰离子化检测器（FID）法测定这24种目标物的含量。与已有的纯露检测方法相比，本方法通过外标法就能准确测定各目标物的绝对含量，且检出限较低。

1、 试验方法

     取少量样品置于分液漏斗中，加入四氯化碳，振荡萃取后静置，收集下层有机相。重复萃取一次，合并有机相，用无水硫酸钠脱水后按照仪器工作条件测定。

2、 结果与讨论

2.1 萃取剂的选择

     选取在水中溶解度不高、对标准品溶解性较好、密度显著大于水的四氯化碳、三氯甲烷和二氯甲烷作为萃取剂，取空白基质10mL置于分液漏斗中，加入0.125mL混合标准储备溶液，加入0.5mL上述萃取剂，后续操作并测定。不同萃取剂下各目标物的回收率见表1。

表1 24种目标物在3种不同萃取剂中的回收率

     由表1可知，24种目标物在四氯化碳、三氯甲烷和二氯甲烷中的回收率均较好，但是以三氯甲烷萃取时三氯甲烷色谱峰和α-蒎烯的重叠，二氯甲烷萃取时溶液容易乳化且马鞭草烯酮的回收率较低（45.1%），因此试验选择四氯化碳为萃取剂。

2.2 色谱行为

     混合标准溶液的色谱图见图1。

     由图1可知，24种目标物在31.0min内全部出峰，分离度均大于1.5，峰形良好。进口和国产迷迭香叶所制天然迷迭香纯露样品溶液的色谱图见图2。

     由图2可知：进口迷迭香叶所制天然迷迭香纯露的主要芳香性物质为1，8-桉叶素、樟脑和α-松油醇，同时还含有少量的芳樟醇、4-萜烯醇和香叶醇；国产迷迭香叶所制天然迷迭香纯露的主要芳香性物质为1，8-桉叶素、樟脑和马鞭草烯酮，同时还含有少量芳樟醇、4-萜烯醇、α-松油醇和香叶醇，说明进口及国产迷迭香叶所制的天然迷迭香纯露中芳香性物质种类和含量差异较大。

2.3 标准曲线和检出限

      按照试验方法测定混合标准溶液系列，以各芳香性物质的质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果显示，各芳香性物质的质量浓度在10.0~200.0mg·L−1内和峰面积呈线性关系，其他线性参数见表2。

     在空白基质中加入混合标准溶液，以3倍信噪比（S/N）对应的质量浓度计算检出限（3S/N），结果见表2。

表2 24种目标物的保留时间、线性参数和检出限

2.4 精密度和回收试验

     按照试验方法对空白基质进行低、中、高等3个浓度水平的加标回收试验，每个浓度水平重复测定6次，计算回收率和测定值的相对标准偏差（RSD），结果见表3。

表3 精密度和回收率试验结果（n=6）

     由表3可知，24种目标物的回收率为80.9%~118%，测定值的RSD为 0.35%~5.0%，不同目标物的回收率差别较大，可能与目标物在四氯化碳中的溶解度与在水中溶解度的差异有关。

2.5 样品分析

     按照试验方法分析4批纯露半成品（标记为纯露半成品1~4，分别对应湖南、河南、云南和进口迷迭香叶所制纯露半成品）和市售纯露成品（标记为纯露成品1~4），检出结果见表4。

表4 样品分析结果

     由表4可知：国内迷迭香种植大省湖南、河南和云南种植的迷迭香叶所制的纯露半成品中芳香性物质的种类和含量差异不大，但是与进口迷迭香叶所制纯露半成品中的差异十分明显，进口迷迭香叶所制纯露半成品中的芳香性物质以樟脑为主，国产迷迭香叶所制纯露半成品以马鞭草烯酮为主，推测这种差异可能与迷迭香品种不同有关。

    4种市售纯露成品中检出的目标物与国产迷迭香叶所制纯露半成品中目标物种类和比例相近，主要芳香性物质均为1，8-桉叶素、樟脑、α-松油醇、马鞭草烯酮和香叶醇，说明市售纯露成品原料可能为国产迷迭香叶；市售纯露成品中主要芳香性物质含量显著低于纯露半成品中的，说明市售纯露成品可能是由纯露半成品稀释或者调配出来的，甚至部分产品可能是添加化学试剂调配出来的，并不是天然迷迭香纯露。

3、 试验结论

     研究人员以四氯化碳液液萃取，气相色谱法测定迷迭香纯露中常见的24种芳香性物质的含量，可为迷迭香纯露香型的调试提供技术支撑。

作者：何浩1，蒋青青1，许银玉1，苏家佑1，上官佳1，汤娱1，潘小红2，曹文豪3

单位：1. 湖南省产商品质量检验研究院；

2. 湖南省药品检验检测研究院；

3. 湖南先伟阳光生物科技有限公司

来源：《理化检验-化学分册》2024年第10期