色谱中的选择性（分离度）是指：一种方法将两种分析物相互分离的能力。它的定义为：保留较强色谱峰的保留系数与保留较弱色谱峰的保留系数比值。通过改变流动相中有机溶剂的百分比、溶剂类型、柱和pH值，可以改变选择性。这些变化对分离能力的影响顺序如下：%B≈tG≈°C<溶剂类型≈柱类型<<pH。

为了在实验中检验这些变化是否能分离两个共洗脱峰，建议做出以下改变：

改变 ±10%B（即有机相）；

用少 5~10% 的乙腈代替甲醇，或用 25~30% 的乙腈代替 35% 的甲醇；

寻找不同选择性的色谱柱；

将 pH 值改变 4~5 个单位。

流动相类型

对于溶剂（流动相）而言，决定选择性的因素主要是：溶剂的酸碱性和偶极特性。为了显示每种溶剂的这些性质，我们可以使用溶剂选择性三角形来直观显示。在这样的三角形中，顶点是三种具有 100% 碱性、 100% 酸性和 100% 偶极性的溶剂。如果存在这样的溶剂，我们就可以根据这些溶剂的不同混合比例来定制我们需要的任何性质。

然而，这种溶剂并不存在。由于最接近理想特性的溶剂不能混溶（如羧酸、胺和具有偶极特性的氯化溶剂），我们使用和尝试混合的三种溶剂是醇（甲醇）、腈（乙腈）和醚（四氢呋喃）。溶剂选择性三角形有助于做出明智的溶剂选择和解决难以分离的峰。

图 1. 溶剂选择性三角形

流动相洗脱强度

与改变流动相类型相比，改变流动相洗脱强度是一种更容易改变色谱峰保留的方法。通常这种方法足以分离色谱峰。不过，与改变流动相类型相比，改变流动相强度对选择性的影响较小。因此，当改变流动相的洗脱强度后仍无法分离色谱峰时，建议改变流动相类型。保留因子的变化与 %B 的函数关系如下式所示：

其中，kw 是纯水中的保留因子。

只需两个数据点即可建立这种线性关系。斜率取决于分子量。因此，随着两个分析物之间分子量差异的减小，两个分析物之间的分离度不会随着 %B (φ) 的变化而发生显著变化。

在进行等度分离时，建议先使用高比例的有机相，然后以 10%B 的比例递减。利用三倍原则（即 B 相变化10%，保留时间大约变化三倍）检查相邻色谱峰之间分离度，有助于预测最佳条件。需要注意的是，由于分析物的 S 值不同，φ 变化时可能会出现峰交叉。

色谱柱类型

改变色谱柱化学成分是改变选择性的有力工具。选择性的差异可能来自硅胶载体材料、键合相的化学成分，或两者兼而有之。在相同类型的硅胶上试用同一制造商生产的不同键合相的色谱柱时，选择性的差异取决于键合相化学性质的不同，因为硅胶颗粒的化学性质应该是相同的。

如果选择性差异较大，则应通过更换制造商和键合相来有针对性地改变硅胶载体类型和键合相。比较数据库（http://www.hplccolumns.org/ database/index.php 和 http://apps.usp.org/app/USPNF/ columnsDB.html）中提供的色谱柱属性，是选择相似或不同选择性色谱柱的更系统方法。这些数据库包含近 700 种固定相，并提供了一种根据 Fs 因子（即选择性差异因子）比较固定相选择性的方法。

表 2. 根据公式(2) 从疏水性差异评估模型计算出的FS因子

两个色谱柱的 Fs 因子根据公式(2)计算。公式中的常数是根据 "平均 "组成的 67 种成分样品确定的权重系数。这些常数描述了平均样品中每个色谱柱参数的相对重要性。随着 FS 因子值的增加，两个色谱柱之间的选择性差异也会增加。表 2 列出了四个色谱柱的 FS 系数计算示例。FS 值为 3 或更小的色谱柱被认为是等效色谱柱，匹配度极高。随着 FS 值的增加，两个色谱柱的选择性差异也随之增大，直到 FS 值达到 50 时，两个色谱柱被认为是正交的。

图2中的雷达图是一种用于理解五维空间中色谱柱比较的可视化工具，它展示了色谱柱选择性差异的基础。

图2 基于疏水差异评估模型参数，四根色谱柱选择性比较雷达图。雷达图的中心点表示：数据库中观察到的某参数的最小值，而顶点对应该参数的最高可能值。

例如，Acquity BEH Shield RP18 和 XBridge BEH C18 的 FS 值表明这两种色谱柱具有不同的选择性，但没有进一步详细说明哪些参数不同。不过，雷达图显示，选择性的差异主要是由于氢键碱性参数不同造成的。

与上述比较相反，XBridge BEH C18 和 Kinetex Biphenyl 之间选择性的差异是由不止一个色谱柱参数的差异造成的。当分析人员了解相邻分析物的物理化学特性时，这种图谱有助于选择合适的色谱柱（例如，如果相邻色谱峰中有一个分析物具有氢键给体点，则应选择氢键受体（B）能力强的色谱柱，如 Zorbax Bonus RP。

其中，H 指色谱柱的疏水性，S* 指空间位阻，A 指氢键酸性，B 指氢键碱性，C 指阳离子交换活性。下标 1 和 2 指比较的两个色谱柱。

压力

以不同流速（即相同流速×时间）运行等效梯度时，可观察到压力对选择性的影响。在这种等效梯度下，色谱峰相对保留时间的变化表明压力的变化导致了选择性的变化。

压力对选择性影响的解释并不直截了当，因为流速的增加伴随着摩擦热的增加。因此，温度对选择性也有影响。在反相色谱中，所有分子的保留率都会随着压力的增加而增加，极性分子和离子化分子受到的影响更大。

压力对选择性的影响随着键合相链长度的增加而增大。流动相的水/有机物比率会影响压力-选择性效应的大小。观察结果与压力改变时溶质分子体积的变化一致。需要注意的是，改变压力来调整选择性并不实际，也不像改变色谱柱类型、溶剂强度或溶剂类型那样简单。

温度

温度是改变选择性的有效方法，尤其是对于离子型化合物。温度的变化会导致 pH 值的变化，从而改变电离程度。因此，改变温度与改变 pH 值具有相同的效果。对色谱柱温度进行微调（1~2°C）可用于调整缓冲液制备过程中的微小误差。温度的变化可能会导致保留时间、选择性或峰形的变化。可能会出现综合效应。温度升高，运行时间缩短，峰形变窄。