01生物制品检测方法开发与验证

 

Q1.仇博士，请教，无杂质标的情况下，有关物质分析方法确认的检测限定量限怎么做

 

答：在无杂质标准品的情况下，这个杂质应该是存在药物中。你可以稀释药物，并检测杂质的信噪比。当杂质的信噪比为10时，就是该杂质的定量限；当信噪比为3时，就是该杂质的检测限。杂质的浓度可用主峰的，或我们假定杂质峰和主峰的反应是一致的，这样我们就可以算出杂质的LOQ和LOD的浓度。

 

Q2.仇博士生物制品的分析方法的质量控制要注意哪些地方？

 

答：一个方法的目的是fit for the purpose，即适用于特定的目的。为了达到对方法的质量进行有效地控制，我们应该按照不同参数的要求来确认方法，满足特定的接受标准。专属性，精确度，准确度这三个是最关键的参数，我们必须要求它们达到我们预定的目标或接受标准。但是我们也不能对方法过于严格要求，也就是说我们的接受标准不要设的太高。否则，我们很难达到，我们总是出偏差，这也不是我们想看到的。

 

Q3.仇博士，我之前做qc的，现在做研发工艺开发，有什么最需要克服的困难和需要增强能力

 

答：研发和QC有些不同。在QC部门，你的任务是按照SOP操作。但是在研发部门，你的任务是开发新的方法，如果碰到问题，你得想办法解决问题。一方面你得好好做实验，观察细节。从实验中，慢慢掌握技术和技巧。更重要的是，搜索参考文献。针对问题，从文献中寻找答案。

 

02生物制品全生命周期的相容性及密封性研究热点及策略

 

Q1.请问输血袋一般用什么方法进行检漏

 

答：输血袋规格小于500ml的可以采用高压放电、真空衰减等方法。

 

Q2.老师，刚才讲到了2828的aql制定，请问不同样本项目的aql如何更合理设定？如根据过往检验结果？还是风险评估？还是和供应商联络？

 

答：建议参考药包材YYB标准附件里的AQL和检验水平以及参考药品抽样规则，综合设计。

 

Q3.还有就是其提取物和浸出物的标准（限度）应如何界定？谢谢

 

答：建议依据特定物质的毒理学数据PDE值或是AI值与最大用量进行界定，如是未知物需要用到SCT或是TTC来界定。

 

Q4.老师,细胞产品的密封性在做风险评估时是否需要考虑全制程？在做密封性检测时如何针对细胞产品特殊性进行抽样方案？

 

答：细胞产品的密封性建议全过程进行控制，因为无菌风险控制是全过程的。具体抽样方案和规则有依据的都是认可以，目前没有统一规定。

 

Q5.请问老师，（蛋白类药液）分装设备料液传输有一小段硅胶管，对其相容性如何控制？谢谢

 

答：建议按生产组件的相容性进行评估风险高中低，来定需要做什么试验，具体可以联系国标客服18102296885。

 

Q6.老师，包材相容性，是3批包材对一批样品，还是3批样品对一批包材，如何选择

 

答：一般符合申报资料的最低要求是3批制剂对1批包材就可以，3批包材对一批样品重点是考察包材批间的差异

 

Q7.请问老师，标签油墨的迁移研究如何做，谢谢

 

答：主要在提取阶段进行设计，将标签油墨中成分进行充分考虑，如有检出相关成分且超过一定的阈值，建议在含有标签油墨的成品中增加相应成分的检测。

 

Q8.生物药的包材相容性怎么做呀？

 

答：生物药的包材相容性一般参照化药进行及特定指导原则进行，依据生物药配方、包装容器性质，按照已发布的相容性指导原则开展六个部分的研究就可以了。

 

03风口浪尖上的细胞治疗产品CAR-NK

 

Q1.CAR-T 产品治疗效果咋样？

 

答：2021年6月以来，复星凯特、药明巨诺的两款CAR-T产品，获批适应症都是用于治疗既往接受二线或以上系统性治疗后复发或难治性大B细胞淋巴瘤患者。

 

复星凯特CAR-T产品：最佳总缓解率（ORR）达到79.2%，客观缓解率83%、完全缓解率58%，4年总生存率达44%；药明巨诺的CAR-T产品：客观缓解率为75.9%，最佳完全缓解率为51.7%。总体来说，CAR-T产品给予经其它方法治疗无效的复发或难治性大B细胞淋巴瘤患者于希望，延长患者生存时间，并有一半的可能性完全治愈。

 

Q2.想问下CAR-NK比CAR-T治疗效果好吗？

 

答：数据报道，在血液瘤方面CAR-NK 和 CAR-T均有较好的治疗效果，而CAR-NK 在实体瘤的研究领域更为突出，有望突破实体瘤治疗的瓶颈。

 

另CAR-NK相比于CAR-T的优势在于：

 

a 免疫原性低，可直接用于异体治疗，制备成现货产品；

 

b 更安全：异体输注基本不会引发GVHD；降低细胞因子风暴发生的风险；体内存活周期短，不容易产生长期的毒副作用；

 

Q3.老师能讲讲实际开发关键点吗？

 

答：细胞治疗产品工艺开发主要从稳定性 和 安全性考量，分别如下：

 

a 稳定性：数量、活率、阳性率等关键质量属性、工艺稳定性、批间一致性、产品稳定性等

 

b 安全性：原材料的稳定性，残留、无菌、支原体、内毒素、交叉污染、防混淆等

 

Q4.细胞产品生产过程中关键点有哪些？

 

答：需严格按照已有生产工艺制备CAR-T产品；

 

a 采血标准、数量、疾病筛查等；

 

b 严格把控生产用试剂耗材：培养基、磁珠等；

 

c 生产周期中的细胞数量、安全性指标检测；

 

d 根据法规和指导文件制定的质量标准：磁珠残留、阳性率、杀伤检测等；

 

e 从采血到回输的全流程管理及文件体系：制造、检定规程和记录、物料、设备使用、方案等。

 

04国内外生物制品稳定性研究

 

Q1. 老师生物药中间产品的稳定性研究可以举例吗？

 

答：比如产品单次收获物，半成品都可以看做中间产品，应该根据生产储存时限进行稳定性研究。

 

Q2. 稳定性样品出样后应放在什么条件下待检，如何评估？

 

答：应该放在样品要求的储存条件下待检，如果你的产品储存条件是2-8℃，你的加速条件是25±2℃，取出后，应该放在2-8℃。

 

Q3. 麻烦问下，样品测定过程，如何保证样品的稳定性？有什么专业指导？谢谢

 

答：应该依据方法验证中进行的溶液稳定性研究制定检验时间，如果对温度非常敏感的样品，应该在检验过程中注意温度存放，尽量缩短检验时间。

 

Q4. 稳定性的条件，设备影响有多大？

 

答：仪器设备应该经过确认，设备精度应该满足实验条件的精度，在这种前提下，设备影响是很小的。另一方面就是检验仪器，同样应该定期进行校验和确认，保证仪器的检测精度，进可能采用同一台仪器检测稳定性样品，消除不同品牌仪器的影响。

 

Q5. 冻融、振摇的影响因素一般怎么做？

 

答：（1）可以依据中国GMP指南中的建议进行冻融试验（见下面图片），也可以根据自己公司产品情况设计冻融试验，应该保持每次冻融试验条件一致。

 

（2）也可以依据欧盟发布的生物制品方法研究中介绍的冻融稳定性进行：

 

A．稳定性质控样品应在解冻循环之间保持至少12小时的冷冻。

 

B. 用于冻融稳定性考察的质控样品应使用新鲜制备的校准曲线和质控样品或已证明稳定的质控样品进行评估。

 

C. 经验证的冷冻/解冻循环次数应不少于试验样品所经历的冻融循环次数，但至少应进行三次循环。

 

Q6. 原料药纸板桶两层PE袋包装，稳定性用小纸筒和2层封口袋包装可以吗？

 

答：样品的封口方式应该和产品的封口一致，这样是可以的。

 

Q7. 原料药储存条件如果是阴凉条件放置，那么长期和加速稳定性实验条件应该怎么设置？

 

答：建议长期在25±2℃，相对湿度60%±5% ，加速在40±2℃，相对湿度75%±5%条件下进行。

 

05LC-MS肽图方法在抗体药物表征与质量控制中的应用

 

Q1.蛋白N端和C端分析的原理是什么

 

答：蛋白N端测序，可以使用蛋白测序仪，从肽链的N端开始，依次测定蛋白质分子的氨基酸排列顺序。使用的是Edman降解的方式。也可以使用质谱法（二级确证）对多肽序列进行测定。如，在2020版药典中提出，用氨基酸序列分析仪或质谱法测定尼妥珠单抗的 N 端序列。

 

此外，C-末端氨基酸序列也可以使用LC-MS进行测定。

 

Q2.怎么样获得高质量肽图并高效进行肽图分析？

 

答：蛋白/多肽样品前处理时，选择合适的酶进行充分酶解（之前做好分子高级结构的打开）。

 

液相分离时，选择合适的色谱柱（如赛默飞Accucore C18 2.1×150 mm（货号：17126-152130）色谱柱）和流动相条件，覆盖范围更宽的液相梯度范围和合理的分离时间。

 

选择碎裂能力更好的质谱仪，如Orbitrap的HCD碎裂模式，能够获得高质量的二级谱图；合适的质谱采集参数。

 

数据分析时，进行合理的参数设置与优化。

 

06安捷伦mRNA疫苗质控方案-高分辨液质系统的加帽加尾分析

 

Q1.在进行杂质或含量分析时，一些物质对仪器和色谱柱损伤比较大，有什么措施可以在日常分析中减少对仪器和色谱柱的？

 

答：如果是试剂 尽量使用高级别试剂 同时降低试剂浓度 如果是样品中杂质 尽可能对样品进行净化后上样

 

Q2.安捷伦是否尝试过mRNA的加帽和加尾的LC.解决方案，而不是必须LC-MS？USP最近的mRNA草案给出的加帽和加尾分析方法都是基于LC的。

 

答：客户更多采用LCMS方法检测加帽率，原因是LCMS可以更好的给出对应组分的鉴定信息并定量。Application Note 5994-3984EN