首先我们先要把几个重要定义弄清楚，在讲纷繁复杂的精密度的时候，我有提到在做CE认证的时候，分析性能要参考CLSI的标准，我们就来看看CLSI的标准EP 17-A2是如何定义检测限的。

在看EP17-A2的定义之前，我们先看看国内的标准和法规中提到的检出限的定义，检出限( Limit of detection) 是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称检测低限(lower limit of detection)或最小检出浓度(minimum detectable concentration), 有时也称为分析灵敏度(analytical sensitivity)，可以看出不是特别清楚。

在EP17-A2中有提到三种类型的检测限，它们分别是:

• LOB(Limit of blank), 就是我们通常讲的空白检测限。LOB指的是用空白样本去测试，在一定的概率下能测得的最高测量结果，请注意一定的概率。

• LOD(Limit of detection), 就是我们通常讲的检测限，就不是用空白样本去检测了，是对低浓度的分析物样本进行测试，在一定的概率的条件下能测得的最低值。

• LOQ(Limit of quantitation), 就是我们通常讲的定量限，这个也是用低浓度的分析物样本进行测试得出的较低的值，这个值的准确性是有要求的，就是不光要能测到，而且还要保证结果是准确的。

我们再用一张图，来和大家详细解释一下LOB和LOD的关系。在介绍这两者之间的关系之前，我先来解释一下统计学上的概念，I型错误和II型错误。

• 所谓的I型错误是指实际上没有分析物，测试结果却显示有分析物，犯I型错误的概率通常用α表示，请见图中的α区域。

• II型错误是指实际上有分析物，测试结果却显示没有分析物，犯II型错误的概率通常用β表示，请见图中的β区域。最理想的情况是把LOB和LOD这两条曲线完全拉开，这样的话α=β=0，实际上这是不可能的，因为在做检测限分析的时候分析物的浓度很低。EP17-A2建议的犯I型和II型错误的概率都是5%, 即α=β=5%。

再用一个具体的例子来进一步解释，对于某测试方法，其LOB是6mmol/l, LOD是8mmol/l, LOQ是10 mmol/l. 对于不同的测试结果，报告代表的意思是不同的。

• 5 mmol/l, 代表没有分析物，浓度小于8 mmol/l

• 7 mmol/l, 代表有分析物，但不能被准确定量，浓度小于10 mmol/l

• 9 mmol/l, 有两个意思：(1) 代表有分析物，但不能被准确定量，浓度小于10 mmol/l  (2) 结果是9mmol/l, 但你在解读这个结果的时候要小心，这个结果不是很准确的

• 11mmol/l, 结果就是11 mmol/l, 而且这个结果还比较准确

了解清楚定义之后，我们要讨论如何来进行检测限的评估，EP 17-A2中有提到三种方法：

• 第一种是经典的方法(Classical approach), 这种方法是在低浓度样本测试时的变化比较一致的情况下使用的(比如，测量值都是偏高或者都是偏低)。

   

• 如果不一致的话，还有第二种方法就是精密度的方法(Precision approach)。

• 最后一种方法是针对定性体外诊断试剂的，叫做Probit方法，定性的体外诊断试剂只会给出两种结果阳性，阴性。它的检测限不会像定量试剂那么复杂，因此用Probit的方法更合适，这个方法的重点是去设定一个百分比(比如: 90%)，检测限就是90%的概率条件下结果是阳性的最低浓度。

接下来和大家讨论一下运用经典方法去做评估该如何去做，要满足一些基本的要求，包括: 

• 两批试剂

• 一台仪器

• 三天

• 四个空白样本

• 四个含低浓度分析物的样本

• 每个样本做两个重复( 每批试剂，天，仪器组合)

• 每批试剂会有60个空白样本重复(考虑到所有的空白样本，时间和仪器)

• 每批试剂会有60个低浓度分析物样本的重复(考虑到所有的低浓度分析物样本，时间和仪器)

得出数据之后进行LOB的计算，计算有两种方法:

• 第一种假定数据不符合正态分布，你就把所有的测试结果进行排位，选择合适的位置上的测试结果作为LOB。举个例子，我们假定α=5%，进行了100次测试，我们可以把这100次结果从低到高进行排列( 1为最低，100为最高), 然后我们选择第95位的值作为LOB。如果没有做100次测试怎么办，标准里面有给出计算公式。Rank position= 0.5 + B* 0.95 (B 代表总的测量数量)

• 第二种数据符合正态分布，你就按照标准里面的公式去进行计算。

接下来再计算LOD, LOD和LOB之间是有关系的，在计算LOD的时候你就假定结果都符合正态分布，按照标准里面的公式进行计算即可。

最后我们讨论一下如何评估LOQ, 评估LOQ时最重要的是要把准确度的指标先设定好，标准里面有提到两种方法，分别是Westgard和RMS。当然在评估LOQ时也要满足一些基本条件，分别是: 

• 两批试剂

• 一台仪器

• 三天

• 每一个样本三个重复( 每批试剂，仪器和天的组合)

• 四个独立的已知低浓度分析物的样本

• 每一批试剂要有36个低浓度分析物样本的重复测试结果( 低浓度分析物样本，仪器和天的组合)

最后我再做一个总结，今天的微课主要和大家分享了两点:

• 和大家解释了LOB, LOD 和LOQ的定义

• 和大家介绍了如何用Classical 的方法进行检测限的评估