01 前言

在2010版GMP对确认和验证的定义是：证明任何操作规程（或方法）、生产工艺或系统能够达到预期结果的有文件证明的一系列活动。

为了深入细致了解验证，今天我们将单独讲解验证中清洁验证的检验方法。从而确保清洁验证的目的。

02 了解目的

首先需要了解清洁（工艺）的根本目的是为了除去产品残留、工艺残留和环境污染。清洁验证则是为了证明清洁（工艺）（清洁SOP）能达到预期的清洁目的。

通过检查（检验）产品残留、工艺残留和环境污染，所带来的影响是否降低到足够低。（在规定的范围内）

清洁验证要保证“设备/系统可以安全地生产后续产品”，在一定程度等同于清洁工艺的安全性评估。因此，清洁验证中所使用的检验方法十分重要，需要进行适当的验证。

03 检验方法的建立

1、清洁验证的检验需要建立专门的检验方法

原因如下：

① 检验的内容是残留物，因此检验的限度值、线性范围，都与产品的检验有很大的区别。

② 如果是外来污染物（如清洁剂），需要开发专门的检验手段。

③ 如果活性成分在清洁过程中发生降解，那么原有的方法可能就不再适用。

2、检验方法建立的所需前提

① 确定清洁方法，包括具体的清洁工艺或清洁SOP。

② 确定取样方法，因为不同的取样方式会对检测结果造成干扰。

③ 最重要的一点，确定残留物及限度标准，围绕残留物的性质和残留限度的大小来选择合适的检验方法。

04 检验方法应考虑的因素

1、 分析方法的选择会受到实际情况的限制，选择的出发点是该方法能满足预期的目的。

2、 开发新的分析方法时，应考虑开发新的方法需要时间、人力、仪器成本。建议首先选用现有的分析方法，或对现有方法的限度值进行调整。比如：药典，药企的内控方法。

3、要考虑到清洁工艺的干扰，如使用清洁剂，要包括对特定成份残留的检测，尤其是当清洁剂的pH值变化较大的，还要考虑到清洁剂对活性成份的影响。

4、还需考虑取样过程的影响，如使用棉签擦拭时，需考虑方法的适用性，棉签的干扰，棉签对回收残留物时的回收率。

5、 当设备表面取样时的回收率可能低于 100%时，需进行适当的校正，以确保检验方法的限度要求能够达到。

6、对特定的成份，还要考虑取样至检测的时间间隔，应评估贮存条件（时间、温度、贮存的小瓶等）对样品稳定性的影响。

7、如果活性成份在清洁过程产生降解，还要考虑到对降解产物的分析，或采用一些非专属性的方法。

05 清洁验证中检验的相关要求

清洁验证的一个关键点是确定残留限度，这里的残留通常是指“产品残留”（活性成份）的分析方法验证。

通常情况下，清洁验证的方法验证与常用的方法学验证一样。

应按照《中国药典》附录9101进行，参照“杂质测定”中定量或限度的方法进行验证，包括准确性、精密度、专属性、线性和范围，以及定量限和检测限等内容，需要注意以下方面：

① 准确性和精密度的验证通常只需要在残留限度范围进行，一般为残留物限度的50%-150%，综合回收率不低于75%，回收率的RSD应不大于10%。

② 定量限和检测限必须低于样品的可接受限度，而且最好是远低于可接受限度，以确保清洁程序的耐用性。定量限通常达到限度标准的1/10，定量要求低于通常仪器分析的要求。

③ 专属性方法应关注可能只有在清洁工艺中使用到的其他物质（例如清洁剂）可能带来的干扰。

通常内毒素检验方法都是药典方法，不需要进行正式的验证，但需要确认其适用性。

经批准的微生物检验方法也不需要额外的方法验证。

06 方法验证与回收率实验

制药企业GMP管理指南中提到“分析方法验证方案可以只包括残留物溶液的验证，也可以包括取样回收率研究，尽管取样回收率研究可以独立于分析方法验证而单独进行”。

但同时会用取样回收率实验（一般是用于擦拭法）来代替方法学验证，这是不全面的，因为这二者还是有区别的。

原因如下：

① 清洁验证最关键的是要“防止出现假阴性的情况”，可能是分析方法的灵敏度不够；

② 也可能是取样操作造成干扰， 或者回收率过低，影响因素较多。

从时间顺序上来说，应该是先做方法学验证，确认方法的可靠性后再进行取样回收率实验。（相对于方法学验证，回收率实验是对取样方法的验证）

二者关注的范围也不同，分析方法的回收率范围一般为定量限至限度标准（或120%），是为了确认检验方法有足够的灵敏度。

而回收率的范围一般在限度标准之上，是为了保证取样操作的可靠性，在清洁不彻底时能够有准确的取样量。

同时，二者也有关联，要考虑到取样回收率对分析方法的影响，如果回收率低于100%时，分析方法的限度标准要经过系数的较正，也要考虑检测限/定量限是否能够达到要求。

References:

[1]《药品生产验证指南》.

[2]《制药企业GMP管理实用指南》，中国计量出版社；

[3] PDA Technical Report No. 29(Revised 2012)：Points to Consider for CleaningValidation；

[4] FDA：GUIDE TO INSPECTIONS VALIDATION OF CLEANING PROCESSES；

[5]《药品生产验证指南（2003版）》，化学工业出版社；