近日，欧洲药典（Ph. Eur.）在药典论坛（Pharmeuropa）35.1中公布了关于兔热原检查（Rabbit Pyrogen Test，RPT）替代策略相关的59篇草案，包括新增通则5.1.13.【热原性（Pyrogenicity）】以及修订其他58个文本，这些文本涵盖了多种产品，包括人用疫苗、血液制品、抗生素、放射性药物等，公开征求意见，征求意见截止日期为2023年3月31日。
欧洲药典关于热原、细菌内毒素检查的策略
欧洲药典通则2.6.8.【热原（Pyrogens）】于1986年首次发表，兔热原检查（RPT）广泛用于检测致热物质，通过将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。大多数热原是细菌内毒素，可以采用欧洲药典通则2.6.14.【细菌内毒素】和2.6.32.【使用重组C因子检测细菌内毒素】中描述的细菌内毒素检查（Bacterial Endotoxin Test，BET）来检测。但细菌内毒素检查（BET）不能检测非内毒素热原。2009年通则2.6.30.【单核细胞活化试验（Monocyte-activation Test，MAT）】引入欧洲药典，提供了一种体外替代兔热原检查（RPT）并能够同时检测内毒素和非内毒素热原的方法。
2021年6月欧洲药典委员会提出了一项战略计划，该战略致力于替代、减少和优化（3R）动物实验，并计划在未来五年内完全替代并最终取消兔热原检查（RPT）。2022年9月发表的移除或替换兔热原检查的策略文件中，公布了一系列新的热原性（Pyrogenicity）检测策略：
引入新的通则5.1.13.【热原性（Pyrogenicity）】，以指导企业选择和实施适当的检查方法：细菌内毒素检查（BET）或单核细胞活化试验（MAT）。新增的通则将涵盖风险评估，以支持使用细菌内毒素检查（BET）作为唯一的热原检查方法，同时考虑可能导致BET未检测到热原的因素。
修订涉及兔热原检查（RPT）的欧洲药典文本，包括：总论药用物质（2034）；药用物质各论；剂型各论注射用制剂（0520）、膀胱内制剂（2811）、用于冲洗的制剂（1116）和用于器官保存的溶液（1264）；各论人用疫苗（0153）；各论人用动物免疫血清（0084）；以及与血液制品、大容量注射剂、容器、放射性药物相关的各论和通则等。修订的文本引入了新通则“热原性（Pyrogenicity）”，取代了“细菌内毒素（Bacterial endotoxins）”和“热原（Pyrogens）”的要求，并提供了如何选择和实施细菌内毒素检查（BET）或单核细胞活化试验（MAT）的具体指导。
修订通则2.6.30.【单核细胞活化试验】和5.1.10. 【细菌内毒素检查使用指南】，并将信息提取和纳入到新的通则5.1.13.中。主要的变化包括灵敏度的描述、内毒素标准曲线的可靠性标准以及含量可接受标准等。
新通则5.1.13. 草案的主要内容
新通则5.1.13. 草案目前已经发表在药典论坛35.1中，该草案旨在从欧洲药典中完全取消兔热原检查，并取消通则2.6.8.【热原（Pyrogens）】，鼓励采用合适的体外替代方法进行检测。主要的内容包括：
来自革兰氏阴性菌的内毒素是受污染药品引起热原反应的最常见原因，通常使用细菌内毒素检查（BET）来检测内毒素。但非内毒素热原（如来自革兰氏阳性菌、真菌、病毒和颗粒）的检测需要进行单核细胞活化试验（MAT）。单核细胞活化试验能够检测内毒素和非内毒素热原。
在生产工艺的开发过程中应进行单核细胞活化试验（MAT），以排除非内毒素热原的存在，生产工艺中进行的任何可能改变产品热原性的变更，建议重复单核细胞活化试验。如果不能排除非内毒素热原的存在，则必须对所有注射剂产品进行单核细胞活化试验。
通则2.6.14.【细菌内毒素】、2.6.32.【使用重组C因子检测细菌内毒素】和2.6.30.【单核细胞活化试验】中所描述的方法已经过验证，不需要重新验证，除非用于特定分析环境中的特定物质或产品。
如果选择细菌内毒素检查（BET）作为唯一的热原评估方法，则需要进行风险评估。如果重要的工艺参数发生变更，则应重新进行风险评估，因为不能排除非内毒素热原的潜在污染。进行风险评估时应考虑的因素包括：生产工艺（化学合成、发酵、生物技术方法）、生物负荷（微生物污染水平，Bioburden）、下游工艺的去除能力和安全性（如目标人群和给药途径）等。
为支持风险评估，建议使用相同的3个批次进行单核细胞活化试验（MAT）和细菌内毒素检查（BET）的验证试验。
欧洲药典新通则5.1.13. 草案与2020版中国药典的区别
