1  方法概述：

 

本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

 

2  所用的仪器和设备

 

2.1  高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。

 

2.2  恒温培养箱必须定期对培养箱的温度进行校验。

 

2.3  培养皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。

 

2.4  普通肉汤琼脂培养基的准备及灭菌见附件A

 

3  测试步骤

 

3.1  采样方法

 

将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基面暴露30分钟（静态），再将培养皿盖盖上后倒置。

 

3.2  培养

 

3.2.1  全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

 

3.2.2  在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

 

3.2.3  每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

 

3.3  菌落计数

 

3.3.1  用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，看是否有遗漏。

 

3.3.2  若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

 

4  注意事项

 

4.1  测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性，准确性。

 

4.2  采取一切措施防止人为对样本的污染。

 

4.3  对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

 

4.4  由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

 

4.5  采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。

 

5  测试规则

 

5.1  沉降菌检测前，被检测洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。

 

5.1.2  沉降菌检测前，被检测洁净室（区）已经过消毒。

 

5.1.3  测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

 

5.2  测试人员

 

5.2.1  测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

 

5.2.2  静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

 

5.3  测试时间

 

5.3.1  对单向流，测试应在净化空调系统运行不少于15min 后开始。

 

5.3.2  对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

 

5.4  沉降菌计数

 

5.4.1  采样点数目及其布置

 

最少采样点数目如下表

 

面  积 m2	洁 净 度 级 别
	A	B	C	D
<10 ≥10-<20 ≥20-<50 ≥50-<100 ≥100-<200	2-3 5 8 16 50	2-3 5 8 16 50	2 2 2 5 10	2 2 2 2 3
注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。

 

在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数见下表

 

洁净度级别	所需Ф90mm培养皿数（以沉降30分钟计）
A、B C D	14 2 2

 

采样点的布置

 

工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。     

 

可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。采样点位置的详细规则见附件B。

 

房间采样点超过10个点，每7天对所有采样点轮流监测一次。

 

5.5  记录

 

监测记录中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。

 

5.6  结果计算

 

5.6.1  用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

 

5.6.2  平均菌落数的计算，见式（1）。

 

                   式(1)

                         

式中：m  平均菌落数；

 

    m1 1号培养皿菌落数；

 

    m2 2号培养皿菌落数；

 

    mn n号培养皿菌落数；

 

    N  培养皿总数。

 

5.7  结果评定标准：

 

静态：

 

洁净度级别	微生物（沉降菌）最大允许数	洁净度级别	微生物（沉降菌）最大允许数
	个/皿		个/皿
A、B级	0	D级	5
C级	3

 

注：表中各数值均为平均值。

 

5.7.1  洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

 

5.7.2  若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

 

6  附件

 

6.1  附件A：培养基的准备及灭菌

 

6.1.1  培养基的准备

 

培养基应购买国家认可的培养基。

 

6.1.2  培养基平皿的制备

 

6.1.2.1  将Ф90mm 的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或160℃干热灭菌2h。

 

6.1.2.2  将培养基加热熔化，冷至55℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。

 

6.1.2.3  待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

 

6.1.2.4  注：制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

 

6.2  附件B：采样点布置

 

洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。