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嘉峪检测网 2025-02-24 09:05
引言
2024.11.25，NMPA发布《中药生产监督管理专门规定（征求意见稿）》，第十八条指出：鼓励持有人或者生产企业研究和应用特征图谱、指纹图谱、多组分含量测定等技术，主动参与提高药品法定标准，不断提升中药质量控制水平【1】。
中药特征图谱/指纹图谱系指中药经适当处理后，采用一定的分析方法得到的能够体现中药整体特性的图谱【2,3】。《中国药典》2010年版开始将中药特征图谱/指纹图谱用于中药的质量控制，随着药典的版本升级，中药特征图谱/指纹图谱得到更加广泛的运用。
本文围绕“中药特征图谱/指纹图谱的建立”展开，梳理了中药特征图谱/指纹图谱的分析方法建立及方法学验证的流程。
1.分析方法建立
Step1：选择合适的检测手段
检测方法的选择，应以反映制剂所含成份信息最大化为原则，通常采用色谱法，如HPLC/UPLC法、HPTLC法、GC法等。对于成分复杂的样品，必要时可采用多种测定方法，建立多张对照指纹图谱，以分别反映不同类型成份的信息。
Step2：确立供试品溶液制备方法
应根据所含主要成份的性质，建立合适的供试品制备方法。通常需要对提取方法和纯化方法进行考察，包括溶剂、操作次数、时间和温度等。
对于成分类别相差较大的样品，可根据类别成分的性质，分别制备供试品溶液，以用于多张指纹图谱的建立。
Step3：确立参照物及参照物溶液的制备方法
值得注意的是，参照物并非用于对照特征图谱/指纹图谱的建立，其作用为：特征峰的定位或定量，辅助特征峰的指认、归属和判定。
参照物通常应包含容易获取的一个或多个主要活性成份或指标成份。应根据所含主要成份的性质，选择适宜的对照品作为参照物，参照物应说明名称、来源和纯度。如果没有适宜的对照品，可选择适宜的内标物作为参照物【2】。
参照物溶液的制备方法应结合参照物的特性建立，对其配制溶剂、浓度等进行考察，可不必与供试品溶液制备方法完全一致。
Step4：建立对照特征图谱/指纹图谱
对照特征图谱/指纹图谱的建立，是基于多批次样品的测定结果，采用统计学或软件辅助方式获得。建立对照特征图谱/指纹图的样品批次、建立方式略有差异，具体如下表【2】：
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区别 |
对照指纹图谱 |
对照特征图谱 |
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样品批次 |
20批以上 |
15批以上 |
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建立方式 |
方式1：采用指纹图谱相似度评价软件获取共有模式作为对照指纹图谱； |
选择各批样品均具有的主要色谱峰（优选活性成份，若活性成份不明确，选择各批稳定出现的色谱峰）作为特征峰，特征峰的峰面积一般应当不小于参照峰的5%。 |
Step5：建立供试品特征图谱/指纹图谱评价方法
供试品特征图谱/指纹图的评价方式、可接受标准略有差异，具体如下表【2,3,4】：
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区别 |
指纹图谱 |
特征图谱 |
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评价方式 |
供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度 |
供试品特征图谱与对照特征图谱中，特征峰相对保留时间范围 |
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可接受标准 |
依据多批次供试品与对照指纹图谱的相似度结果拟定质量标准，一般不得低于0.90 |
一般不得过±10% |
2.方法学验证
特征图谱/指纹图谱分析方法学验证包括精密度、耐用性、稳定性等，可参考现行药典和国家药品标准工作手册进行。为方便读者学习，整理下表供参考：
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验证指标 |
指纹图谱 |
特征图谱 |
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精密度 |
重复性：平行配制6份供试品溶液，其相似度不得低于0.95。 |
重复性：平行配制6份供试品溶液，特征峰相对保留时间RSD一般不得过3%。 |
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耐用性 |
改变实验条件（如色谱柱、仪器、试剂等），与正常条件比较，相似度不得低于0.90。 |
改变实验条件（如色谱柱、仪器、试剂等），与正常条件比较，特征峰相对保留时间应在±10%以内。 |
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稳定性性 |
取同一个供试品溶液，在不同时间点进样检测，相似度不得低于0.95。 |
取同一个供试品溶液，在不同时间点进样检测，特征峰相对保留时间RSD一般不得过3%。 |
3.“指纹图谱相似度评价软件”的领取方式
中药指纹图谱相似度软件为国家药典委员会官方发布，登录官网https://www.chp.org.cn/#/index，点击“公众服务”→“指纹图谱”，弹出登录界面（注：未注册用户需注册后方能使用该功能），会员可下载软件系统。
参考文献
【1】《中药生产监督管理专门规定（征求意见稿）》
【2】国家药品标准工作手册
【3】中药制剂特征图谱研究技术指导原则（试行）
【4】中药新药质量标准研究技术指导原则（试行）
来源：注册圈
