紫外分光光度法是利用物质对紫外光谱区域内的光具有选择性吸收的现象，对物质进行定性和定量分析的方法。

用于测量和记录待测物质分子对紫外光的吸光度及紫外吸收光谱，并进行定性定量以及结构分析的仪器，称为紫外吸收光谱仪或紫外分光光度计。

本次以TU-1810系列这个型号为例，向大家讲解紫外可见分光光度计的性能和操作步骤。

技术性能

1、波长范围：190nm-1100nm

2、波长准确度：±0.3nm

3、波长重复性：≤0.2nm

4、光度准确度：±0.002Abs（0-0.5A），±0.004 Abs（0.5-1A），±0.3%T(0-100%T)

5、测光范围：吸光度-0.3-3Ab

①数字键

用来输入波长，浓度，日期等数据的输入。

②编辑键

<ZERO>:校空白键，用于调0.000 Abs 和 100.0%T

<GOTO>:波长设定键

<▲>:上键，光标向上移动   <▼>:下键，光标向下移动

<START/STOP>:开始/停止键

<CLEAR>:清除/删除键

<RETURN>:返回键，用于返回上级菜单

<ENTER>:确认键，用于数据和菜单的确认

操作步骤

1、开机

打开样品室盖，检查样品室中是否放置遮光物，若有取出。打开电源开关预热30min。

2、选择光源

电源开关打开后，钨灯即亮；若仪器需要在紫外光区（200nm～290nm）工作，则需将光源切换至氘灯；若仪器需要在紫外光区（290nm～360nm）工作，则要同时点亮氘灯和钨灯。

3、选择波长

按数字键1输入实验所需的波长，选择须用的单色光波长。

4、校准

目前型号较新的分光光度计具有开机自动校准功能，无自动校准功能的设备使用前需参照使用说明书手动校准。

5、测量

按START即可开始测量

如试验方法中无特别规定，通常使用装有蒸馏水的吸收池调零后放入样品和参比样进行测试，并记录测试结果。

用于分光光度计测定样品物质含量的基本原理是，样品在一定波长下光吸收值的大小与样品中该物质浓度成正比。而最好的线性关系是在光吸收值为 0.3 ～ 0.7 时。

因此，测定前要经过预实验确定合适的样品浓度，让反应后的待测溶液的光吸收 值位于这个范围内。否则，待测数据不能正确反映实际变化。

如果不同样品之间浓度差异较大，则在测定时应先测定低浓度( 浅色) ，再定测高浓度( 深色)

6、数据处理

定量测试时通常需要先测定若干个已知浓度的待测物标准样品，根据其吸光值与浓度绘制标准曲线。目前新型号的紫外分光光度计本身都有制作和计算标准曲线的功能，具体操作方式可参照设备使用说明。不具备标准曲线绘制功能的设备，可利用Excel软件或坐标纸辅助绘制。

7、关机

测量完毕，取出吸收池，清洗并晾干后入盒保存。关闭电源，拔下电源插头，在样品室内放入干燥剂，盖上样品室盖，罩上防尘罩。

注意事项

1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。

2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。

3、提供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。

4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确。并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。

5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。并进行平行操作，每份结果与平均值的偏差应在±0.5%以内。

6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。

日常维护及保养

1、若实验中需大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。

2、指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。

3、比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

4、操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。

5、分光光度计由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光 电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在 预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。

6、放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。

7、比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下：

分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处。将某一个池的透射比值调至100%，测量其它各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。

参考资料：

https://jascoinc.com/learning-center/theory/spectroscopy/uv-vis-spectroscopy/instrumentation/