1、 在做生物指示剂（BI）芽孢含量测试时，如何确保生物指示剂芽孢条完全振碎？【原问题：菌片怎样打碎？】

答：1）在阳性对照室生物安全柜中，将BI放进装有5mL无菌纯化水和4颗4-6mm直径玻璃珠的试管内，浸泡不少于15分钟。

2）将试管在振荡器上振荡，直到BI变成纸浆，再加入5mL无菌水，振荡1分钟，混匀。

3）不同厂家的BI振碎的时间不一样，试验过程应确保滤纸条被完全振碎。

2、 灭菌后的自含式生物指示剂在48小时内培养基变黄,48小时后又变绿了，这种情况应该怎么判定结果？

答：结果判定为阳性。只要培养基变黄，应该按照阳性处理，停止继续培养。

3、 灭菌过程结束将生物指示剂(BI)取出来，到培养，这个时间间隔需要怎么去确认？

答：ISO11138-7:2019条款9.2.2明确规定“从装载中去除的BI应在经确认的规定时间内取出，其后，应在规定的时间内通过无菌技术把BI转种到合适的生长培养基上，并在恰当的温度下进行培养。”具体确认方法，可以在日常灭菌中出柜选择不同时间间隔节点的送检时间，例如出柜后0时刻、8小时、16小时、24小时、48小时等，每个时间节点重复做三批次及以上，观察BI培养结果是否有影响。

4、 在菌片的7天培养观察期内，菌片培养阳性应该是白色浑浊，但是再培养几天变红了，这种情况正常吗？

答：环氧乙烷灭菌生物指示剂的菌片含有萎缩芽孢杆菌芽孢，培养后培养基的颜色由白色（浑浊）变为红色是正常现象。因为萎缩芽孢杆菌（ATCC9372）的显著特征是在含有有机氮源的培养基上生长时产生褐色或棕红色色素，因此随着培养时间的延长，培养基颜色会由白色（浑浊）变为红色。

5、 使用方购买供应商的生物指示剂（BI）时需要供应商提供哪些资质证明？

答：使用方可要求生物指示剂供应商提供：1）消毒产品生产企业卫生许可证；2）安全评价报告；3）“全国消毒产品网上备案信息服务平台”备案信息。

6、 菌片阳性观察日期应该是出现浑浊就观察结束？还是需要继续观察七天?

答：ISO11138-1：2017中的7.3.2推荐了对于已确认过程中的生物指示剂的培养时间为7天。用户应考虑对生物指示剂制造商推荐的培养时间进行确认，如生物指示剂制造商在使用说明书中明确规定产品在7天内经培养后为阳性，不要继续培养已经呈阳性的生物指示剂，可以结束对生物指示剂的培养和观察。

7、 生物指示剂(BI)纸片机械破碎，这里的机械是用容器装好放在振荡器上振荡几分钟达到破碎效果吗？

答：是的。在阳性对照室生物安全柜中，将BI放进装有5mL无菌纯化水和4颗4-6mm直径玻璃珠的试管内，浸泡不少于15分钟。然后将试管在振荡器上振荡，直到BI变成纸浆，再加入5mL无菌水，振荡1分钟。不同厂家的BI振碎的时间不一样，最终都要是滤纸条振碎为止。

8、 生物指示剂灭菌后放置时间没有明确规定的话，可以连续几天灭菌后的实验攒在一起做实验吗？是否可以不用每天去做无菌试验?

答：ISO11138-7:2019条款9.2.2明确规定“从装载中去除的生物指示剂应在经确认的规定时间内取出，其后，应在规定的时间内通过无菌技术把生物指示剂转种到合适的生长培养基上，并在恰当的温度下进行培养。”具体确认方法，可以在日常灭菌中出柜选择不同时间间隔节点的送检时间，例如出柜后0时刻、8小时、16小时、24小时、48小时等，每个时间节点重复做三批次及以上，观察BI培养结果是否有影响。如果这个时间间隔贵司有经过确认证明不会对培养结果造成影响，那么可以一起检测。如果没有，则应尽快进行培养。

9、 如果多个灭菌批一起做实验，阳性是不是只做一份就好？

答：针对此问题，标准ISO11138-1：2017和ISO11138-7:2019无明确要求。建议如下：

1）如果在同一天同一个时间段同时检测经过灭菌的多个批次生物指示剂，使用的是同一生产批号的环氧乙烷灭菌生物指示剂，阳性对照需要使用与灭菌批相同批次的生物指示剂，可以只做一份阳性对照。

2）如果不在同一天或者不同时间段（例如：上午/下午）分开检测，建议各准备一份阳性对照。

3）多个灭菌批使用的生物指示剂有多个生产批号的情况，建议检测时需要有对应多个生产批号的生物指示剂作为阳性对照。

4）如果不在同一天或者不同时间段（例如：上午/下午）分开检测，建议各准备一份阳性对照。

5）多个灭菌批使用的生物指示剂有多个生产批号的情况，建议检测时需要有对应多个生产批号的生物指示剂作为阳性对照。

10、 生物指示剂的阳性一定要拿到阳性对照室做吗？

答：1）自含式生物指示剂：可以在一般环境条件下将阳性对照的生物指示剂用配套的夹具挤破指示剂内部安瓿管，甩动指示剂使培养基充分浸没底部菌片，在规定条件下培养；

2）菌片式生物指示剂：应在阳性对照室生物安全柜中，采用无菌操作手段将菌片转入到液体培养基中，保证菌片完全浸没，最后在规定条件下培养。