一、阪崎杆菌的生物学特性

1、形态染色

阪崎肠杆菌属肠杆菌科肠杆菌属，因此本菌具备肠杆菌基本形态特：革兰阴性粗短杆菌，有周身菌毛，无芽胞，有动力[1]。

2、培养特性

能在普通营养琼脂、血平板、麦康凯(MAC) 琼脂、伊红美兰 (EMB) 琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培养基上生长繁殖。培养最佳温度25～36℃，在 6～45℃下都能生长，某些菌株可在47℃下生长[8]。在胰蛋白胨琼脂 (TSA)、脑心浸液琼脂(BHI)及血平板上经25～36℃培养24 h后，形成 1.5～2.5mm, 黄色菌落。在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBG)能产生紫红色菌落[2]。

二、阪崎杆菌的传统检测方法

阪崎肠杆菌检验程序见图 1：

1、基本步骤如下：

取检样100g（mL）加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养18 h±2h。移取1mL转种于10mL mLST-Vm肉汤，44℃±0.5 ℃培养24 h±2h。

轻轻混匀mLST-Vm 肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃±1℃培养18 h±2 h。

挑取1个～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25℃±1℃培养48 h±4 h。自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。

2、结果与报告

综合菌落形态和生化特征，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。

3、注意事项

（1） 取样前应对样品包装的开启处和取样勺进行消毒。

（2） 检测样品不能低于333g。

三、检测新技术简介

1、荧光法选择性培养基法

该方法也是利用α-葡萄糖苷酶活性的检测方法[3]。在营养琼脂基础上添加4 -甲基-伞形酮-α-D-葡萄糖苷 (α-MUG)。阪崎肠杆菌在该培养基上形成黄色菌落，在紫外光照射下发生荧光。该法灵敏度和特异性都比较好 ，已在多个国家开展使用 ，均取得稳定可靠的结果。

2、对硝基酚光电比色法

利用阪崎肠杆菌的α-葡萄糖苷酶活性，分解对硝基酚-α-D-葡萄糖苷底物，释放黄色的对硝基酚，在405nm 波长下测定吸光度，根据吸光度的大小，确定样品中阪崎肠杆菌是否存在。方法是常规增菌，在 VRBG 或 TSA 平板上挑取可疑菌落 ，制备成一定浓度的菌悬液与底物混匀，37℃4 h 后进行比色测定[4]。

3、荧光定量 PCR 方法 　

荧光定量 PCR 技术的基本原理是在PCR 反应体系中加入荧光基团，该基团是一对合适的荧光物质，可以构成一个能量供体和能量受体对，其中供体的发射光谱和受体的吸收光谱重叠，在 PCR 反应基因扩增时，激发供体而释放的荧光能量正好被受体吸收，使得供体的荧光强度减弱而受体荧光强度增强，利用荧光信号强弱变化积累实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

实时荧光定量PCR技术已广泛应用于多种食品微生物污染的检测。SEO等利用阪崎肠杆菌部分大分子合成(MMS)操纵子基因序列建立了奶粉中阪崎肠杆菌的实时荧光定量PCR方法，能检测到0.6-1g奶粉中的阪崎肠杆菌，且比传统培养法检测时间从6～7天缩短至2天内完成。对68株阪崎肠杆菌和 55株非阪崎菌进行检测 ，未出现假阳性和假阴性，具有很好的特异性。