一、实验原理

油红O（Oil Red O）脂肪染色法是一种常用于检测组织或细胞内脂肪情况的方法。油性红O是一种脂溶性染料，具有很强的脂溶剂和染脂剂特性。其染色原理基于油性红O与组织或细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白的特异性吸附作用，从而使脂肪能够被染色。

在油红O染色的过程中，染料能够高度溶解于脂肪内部。当染料溶液加入到组织切片或细胞样品中时，染料会从有机溶剂转移至组织或细胞内的脂质中。这种转移过程导致组织内的脂肪结合油性红O染料而呈现红色。油性红O染色方法可用于分析细胞样品中脂质的状况。通过显微镜观察，可以清晰地看到染色的脂肪滴，从而评估细胞内脂质的含量、分布和形态。这项技术在研究脂质代谢、肥胖症、心血管疾病等领域中具有广泛的应用。

二、实验步骤

1、弃去培养基，用PBS洗涤两次，再将油红O固定液添加至培养皿中固定30分钟（可考虑延长时间）。

2、制备油红O染液，将储备液5%油红O染液与蒸馏水按3:2稀释。

3、调配60%异丙醇，将6毫升异丙醇与4毫升蒸馏水混合。

4、倒掉固定液，用蒸馏水洗涤两次。

5、加入60%异丙醇浸泡20秒（不要浸泡太久）。

6、在去除60%异丙醇后，加入新配制好的油红O染色液，浸泡20分钟。目的是使油红O从60%异丙醇中转移到脂质中，从而使脂肪滴呈现出红色。

7、弃去染色液，用60%异丙醇漂洗20秒至清晰。使用蒸馏水洗涤2-5次，直至无多余染料。

8、加入苏木素染色液，对细胞核进行1-2分钟的复染。清除染色液后，使用蒸馏水洗涤5次。

9、将细胞浸泡1分钟于油红O缓冲液中，然后倒掉。

10、加入蒸馏水以覆盖细胞，然后在显微镜下观察和拍摄图像。

11、使用软件Image J软件分析油红染色中的脂滴面积比。

三、注意事项

1、建议在实验设计中设计阴性对照和阳性对照。例如，可以选择脂质丰富的肝脏组织作为阳性对照样本，而针对阴性对照则可参考文献选择无脂肪沉积的组织样本。这样的设计有助于验证染色结果的准确性和可靠性，确保所观察到的油红O染色效果与预期一致。

2、染色结果应尽快观察及拍照，不能长期保存。

3、油红O用于染色脂质物质，但由于石蜡切片处理过程中无法保留脂质物质，因此石蜡切片不能进行油红O染色。

4、在进行油红染色时，需要轻柔操作，因为脂滴容易移位。

5、苏木素复染时间不能过长。

如图为肝脏的油红O染色图片（对照组与处理组）

参考资料：

Wang W, Chen S, Xu S, Liao G, Li W, Yang X, Li T, Zhang H, Huang H, Zhou Y, Pan H, Lin C. Jianpi Shengqing Huazhuo Formula improves abnormal glucose and lipid metabolism in obesity by regulating mitochondrial biogenesis. J Ethnopharmacol. 2024 Jan 30;319(Pt 1):117102. doi: 10.1016/j.jep.2023.117102. Epub 2023 Sep 3. PMID: 37660955.

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