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嘉峪检测网 2024-12-31 08:29
大家好,今天想和大家聊一聊“卵母细胞体外成熟(IVM)技术”。
卵母细胞体外成熟,顾名思义,就是让卵母细胞在体外培养的环境中从未成熟状态变为成熟状态。
那么卵母细胞在卵巢里好好的,为什么要把它们拿出来再研究?以及这个体外成熟过程是怎么样的呢?一起来看看吧。
1.为什么要进行卵母细胞体外成熟?
卵母细胞是雌性动物重要的生殖细胞,成熟的卵母细胞以正确排出第一极体为特征,在排卵后会在输卵管壶腹部等待精子的进入,精卵结合后继续发育成胎儿。每个宝宝的诞生都和母亲健康的卵母细胞密不可分,一旦卵母细胞出了什么问题,那将产生什么后果可想而知。为了研究各种因素对卵母细胞的影响以及如何提高卵母细胞质量,于是我们就需要一个卵母细胞体外成熟模型,毕竟不方便在体内直接进行研究。
小鼠GV期及MII期卵母细胞
2.卵母细胞成熟阶段划分
卵母细胞起源于胚胎发育早期的胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells, ESCs),ESCs分化成卵原细胞,卵原细胞进入生殖腺后开始增殖,随后,卵原细胞分化为初级卵母细胞并停滞在双线期,又称为GV期,这一停滞过程从未出生一直持续到青春期,到达青春期后,卵母细胞继续往后发育,在经过减数第一次分裂后排出第一极体,随后又停滞在减数第二次分裂中期(MII),等待受精才会完成减数第二次分裂阶段。在这个过程中,染色体有两次机会整齐排列在赤道板上,小伙伴们想一想是哪两次呢?不妨把你的答案留在评论区和大家一起讨论吧!
3.卵母细胞体外成熟体系
卵母细胞的体外成熟(In Vitro Maturation, IVM)需要适宜的培养环境,如充足的营养物质,适宜的CO2浓度,模拟体内环境的温度等。
卵母细胞的采集与培养:用于体外成熟的卵母细胞通常由卵巢中获得,获取方式有抽吸法、切割法(对于大动物适用)、刺破卵泡法(对于小动物适用)等,具体使用场景可以灵活调整。在获取卵丘卵母细胞复合物(COCs)后,挑取B类及以上的COCs放入培养液中,在38.5摄氏度,5%CO2浓度培养箱中培养。
卵丘卵母细胞复合物等级划分
卵母细胞培养基成分:卵母细胞的成熟培养需要充足的营养,常用的培养基有TCM-199,M2等,不同的培养基适用的范围并不相同,如TCM-199培养基含有多种氨基酸、维生素和矿物质,而M2则含有较高的离子强度,对渗透压具有更好的缓冲效果。此外,还会添加血清、激素、生长因子如表皮生长因子(EGF)等成分,以更好模拟体内环境。
卵母细胞的体外成熟需要操作人员格外的小心,以免造成污染而导致实验失败。
来源:实验老司机