什么是组织交叉反应？

组织交叉反应 (Tissue Cross-Reactivity, TCR) 研究是针对含有互补决定 (CDR)的抗体和抗体样分子推荐的体外结合试验，目的是确认受试物与药效靶组织抗原表位的结合，检测其是否与非靶部位组织抗原结合，确定非临床安全性试验相关动物种属及为毒性靶器官的预测提供参考。简单来说，TCR的试验结果可以作为靶标分布的补充信息，在一定程度上预示了体内试验的毒性结果。

什么需要做组织交叉反应？

含有互补决定区（CDR）的抗体和抗体样分子，如单克隆抗体、双特异性抗体、抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugate，ADC）、部分细胞制剂等。即含有靶向结合的药物，在非临床评价研究中，可以进行组织交叉反应试验。现阶段肿瘤治疗中靶向治疗已经是公认的研究方向，设计相应的治疗药物，进入体内特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会涉及肿瘤周围的正常组织细胞。因此，非预期的脱靶结合就突出重要，组织交叉反应作为体外试验，其结果可以一定程度上预测毒性靶器官，这也是TCR近年来成为“显眼包”的原因。

怎么做组织交叉反应？

1、技术：组织交叉反应试验涉及的技术方法有免疫组织化学技术(Immunocytochemistry, IHC)、组织芯片技术、Western印迹分析技术以及流式细胞等，目前IHC是TCR研究的主要方法。

2、法规：国际上已发布的涉及 TCR试验的技术指导原则主要包括食品药品监督管理局（FDA）的人用单克隆抗体产品的生产和检验的考虑 (PTC) 指导原则 (4个版本)、国际协调会议 S6指南 (ICH S6) 以及欧洲药品管理局 (EMEA) 发布的相关指导原则，对 TCR试验的科学和技术性进行了阐述。我国国家药品监督管理局 (NMPA) 发布了《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》等相关指导原则。

3、实验系统 (IHC方法) ：人、动物的冰冻组织；FDA在PTC指南的附录I为32种推荐成人组织列表。

4、试验设计（IHC方法）：方法开发与释放（IHC条件的开发与工作浓度的选择）、对照组设定（阳性/阴性对照、分析对照）、组织验证组设定、结果判定。

组织交叉反应试验相关指导原则

截至目前，关于TCR研究国内外发布了多个指导原则（表1），对TCR试验的科学性和技术性进行了全面阐述。

【表1】国内外发布的TCR研究相关指导原则

组织材料

对于TCR研究组织材料的规定上，国内外指导原则存在一些异同之处。

FDA：PTC指南应使用快速冰冻的成人（如果有）和（或）胎儿组织来进行人重要器官、血液成分及预期靶细胞或组织的免疫组化研究；至少3个无关联的捐献者来源的人体组织；关于死者的一般信息必须收集，包括年龄、性别、民族、病史以及死亡原因。所取组织最好是年龄＞18岁的成年人；首选手术组织，也可使用尚未自溶的尸检组织；特殊情况下，可使用代表性的培养细胞系、干细胞及胚胎/胎儿组织；附录I列出了32种快速冰冻成人组织（图1）

【图1】FDA规定的TCR研究人体组织清单

NMPA：《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》可以使用冰冻及石蜡包埋的各种正常脏器组织测定；来源于肿瘤相关抗原的单克隆抗体应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。

结语

随着抗体类药物研究越来越多，考虑其安全性，组织交叉反应试验在药物临床前的安全性评价中也越来越受到重视，变成了“显眼包”。组织交叉反应的研究要充分解读国内外指导原则，保证该研究过程的科学性、结果的可靠性，其结果可以确认受试抗体与药效靶组织抗原表位的结合，检测抗体是否与非靶组织抗原结合，帮助非临床安全性试验相关动物种属确定及毒性靶器官的预测，为将来临床用药提供参考。