7月2日，国家药品监督管理局、国家卫生健康委发布公告，正式颁布2020年版《中国药典》，新版药典将于今年12月30日起正式实施。新版药典对环境监测、无菌检查方法、微生物检测、灭菌验证等都做出了相关要求。本文结合了《医疗器械无菌试验检查要点指南》中的检查内容，对新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点进行了整理，供大家参考。

5、菌液制备

（1）接种金葡、铜绿、枯草的新鲜培养物至胰酪大豆陈液体培养基中或胰酪大豆陈琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35°C培养18~24小时。

（2）接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上， 20~25°C培养2~3天， 上述培养物用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。

（3）接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，20~25°C培养5~7天或直到获得丰富的孢子，加入适量含0. 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液 ,将孢子洗脱。

（4）采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，制成适宜浓度的孢子悬液。

（5）菌悬液若在室温下放置，一般应在2小时内使用；若保存在 2～8℃可在 24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃,在验证过的贮存期内使用。

注意：白色念珠菌的培养时间由原来的24~48小时调整为2~3 天；菌悬液不再强制要求100cfu/ml以下；洗黑曲孢子的聚山梨酯80的溶液不再强制3~5ml，而应根据孢子的喷落量灵活调整。

6、培养基接种 

（1）取适宜装量的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于l00cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照.

（2）取适宜装量的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照。

（3）接种细菌的培养管培养时间不超过3天，接种真菌的培养管培养时间不得超过5天。逐日观察结果。

注意：真菌的培养时间要稍微长，其他的应控制在3天之内，时间长了容易污染环境或造成其他实验室危害。

7、方法适用性试验

进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。