一、培养基温度确定：

1.标准要求：熔化后的培养基放入47℃~50℃的恒温装置中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高恒温装置温度),直至使用,培养基达到47 ℃~50℃的时间与培养基的品种、体积和数量有关。(GB 4789.28-2024)

2.固体培养基倾注的温度在45℃-50℃，怎么确定？

技巧：用手心轻轻碰一下盛固体培养基的三角瓶，感觉不烫，然后用手背也感觉一下，感觉烫手，这时的温度大概是50℃。（口诀：手心不烫手背烫）。

3.为什么要确定培养基温度？

温度过高，培养基凝固时间过长，培养皿皿盖上会出现大量冷凝水，不利于后续实验。

对于需要添加不耐热的抗生素等试剂的培养基，温度过高，试剂容易失效。

二、防止培养皿中有冷凝水：

1.待固体培养基降低温度至45℃-50℃，开始倒平板，此时水蒸气蒸发速度减慢，皿盖产生的水就少。

2.即使温度至45℃-50℃，培养皿盖还是有水蒸气、还是会有水珠，怎么办？倒平板的时候把皿盖打开，待全部倒完后，超净台里凝固5min后，关闭皿盖，倒置放置，备用。（不严谨）

3.在倒培养基时，可以一个垒一个，静置直到全部培养皿凝固，倒置备用。这种方法，除了最上面的皿盖有水蒸气，其余皿盖都不会有水蒸气产生。（专家不建议这样操作）

三、预防培养基气泡形成：

(1)灭菌之前，琼脂粉要充分溶解。

(2)灭菌后待温度降至50-60℃，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一个方向摇起来，直到摇匀为止。

(3)灭菌之后，需要添加抗生素等试剂的培养基待温度降至45-50℃，再加入抗生素等试剂，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一个方向摇起来，直到摇匀为止。

(4)已经产生好多气泡，又消不掉的培养基，用微波炉等加热设备重新加热一下，温度高了气泡也就从培养基中跑出来啦。

四、倒平皿保持均一性：

倾注平皿要左三圈，右三圈的晃动，注意不要把平皿盖沾上，并且要轻轻晃动。

五、具体对待：

前面几点讲了倒平皿的最适温度保持在45-50度，但不同品牌的琼脂质量不一样，同样按照国标中的配方琼脂含量1.5%， 有些琼脂凝固很快，有些凝固慢一些，还有环境温度偏低，琼脂凝固也会快一些，要根据实际情况，适当调整琼脂的含量，在室温较低时我们所配的培养基琼脂 用量就偏少一些，还有在倒平板和混匀时动作要快一些，室温实在太低，也可以把培养皿放到烘箱中适当加热一下（40度左右）。

六、培养基厚度：

1.倾注熔化的培养基至平皿中(直径90 mm的平皿﹐通常要加入15mL~20 ml琼脂培养基),使之在平皿中的厚度至少为3mm。如果平板需贮存，或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃,则需要倾注更多的培养基（GB4789.28-2024）。

但是具体操作如何把握，这是个难题？

技巧：倒平板的时候，铺满整个培养皿底部，稍微再倒一点点就是20mL，再稍微多倒一点点就是25mL，这个需要经验，多倒几次就能把握。