β-葡萄糖苷酶活性的测定方法

目前对于β-葡萄糖苷酶活性的测定方法很多，概括起来主要有电化法，荧光法，分光光度法等.

1)Barush和Swiain法，也就是分光光度法：它以水杨苷做底物，将水杨苷裂解为水杨醇和葡萄糖，然后将酶解产物中的水杨醇用4-氨基安替比林显色，再用分光光度法比色测定；也可用熊果苷作为底物，对产生的葡萄糖可用碘量法加以测定。

2）荧光法;用4-甲基伞形酮β-D-葡萄糖苷作为底物，经β-葡萄糖苷酶作用，专一地分解为4-甲基伞形酮，利用伞形酮与4-甲基伞形酮具强烈荧光特点，通过测定酶解有力出的4-甲基伞形酮的荧光的特点，通过测定酶解游离出的4-甲基伞形酮的荧光吸光度计算酶的活性。

3）比色法，以对小鸡苯基β-D-葡萄糖苷作为底物进行酶解，底物水解后释放出来的对硝基苯酚在400-420nm可见光范围内有特征吸收峰，可直接在400-420nm之间比色测定。

4）梁华正等人研究了以京尼平苷为底物检测β—葡萄糖苷酶活性的一种新方法。京尼平苷经β-葡萄糖苷酶水解后产生京尼平，京尼平能与氨基酸反应生成稳定的蓝色，在590nm处有特征吸收峰。β-葡萄糖苷酶活力在0.0-1U/ml范围里呈线型关系，最低检出限为0.02U/ml。

另外还有电化法，该方法是以扁桃苷作为底物，根据所产生的氢化物，用于自发（内）电解池相联结的一对银-铂电极的方法来测定其β-葡萄糖苷酶活性。

以水杨苷酶反应底物的Barush和Swiain法检测的是经β-葡萄糖苷酶水解底物产生的极微量的葡萄糖，反应易受干扰，且检测灵敏度不高。荧光法最初用于酶含量低的高等动物组织中的β葡萄糖苷酶的检测，灵敏度高且快速，但是由于实验过程操作复杂，且重复性不好，现在应用不多。以对硝基本机-β-D葡萄糖苷为酶底物的比色法最为普遍，且在实验中该方法操作简单，快速，灵敏度高重现性好。以京尼平苷为底物检测β-葡萄糖苷酶活性的方法与pNPG法相比，灵敏度低，但是精密度和准确度较好，结果稳定。

参考文献：李华.高丽 β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究[N].食品与生物技术学报.2007年3月（第26卷第2期）