1、Purge阀滤芯堵塞

在做实验的过程中，将流动相（过滤超声）配好，HPLC仪器就绪，打开Purge阀（逆时针旋转180°），调节流速，发现系统压力较平时高（异常），可能是滤头或者Purge阀内的滤芯堵塞导致，经检查滤头并无堵塞，于是将Purge阀拆开，将里面的滤芯取出，发现滤芯比较脏（表面一层黑色吸附物），于是更换新的滤芯（也可以将滤芯放入10%异丙醇内超声3-5min），重新安装好后，打开Purge阀，压力正常。

（通常在平衡色谱柱前，先打开Purge阀，将流动相内的气泡排除，以免引起系统压力波动，进而影响化合物的保留。实验中发现压力异常，排除流动相（超声过滤，不会引起堵塞）引起滤头堵塞；另一个原因就是Purge阀内的滤芯污染，更换后正常，所以在日常工作中要对其进行定期维护）

2、色谱柱太脏接检测器后，导致的检测器污染

同事将其事先清洗好的色谱柱外借，归还后，重新平衡柱子（接检测器），发现压力异常（较平常时的2倍），且色谱图中出现好多峰，于是用高比例的盐相冲洗色谱柱，压力一直未减小，说明以排除色谱柱原因；于是开始排查：未接色谱柱时，仪器系统压力正常；打开Purge阀，压力正常；将六通阀处的5/6号管线反接，冲洗针座，重新接好后，压力未明显减小；将检测器的入口端拆开，压力明显下降，说明是检测器污染，于是将检测器的进口和出口的管线反接，用超纯水低流速冲洗，之后正常连接，仪器压力正常。

（首先通过压力线排除系统自身的原因；通过Purge阀，排除其滤芯的原因；用高浓度的盐相进行冲洗是为了将残留在色谱柱内的蛋白冲洗出来（样品为蛋白样品）；进样针座一般不会堵，这里简单的进行冲洗；不接检测器，压力明显下降，说明检测器已被污染，所以建议在冲洗柱子或启用新的色谱柱时不连接检测器）

3、含盐的的流动相未再次过滤导致的压力偏高

基本的实验条件：弱阳离子交换柱，缓冲液作为流动相（用了一天一夜）（对于离子交换，流动相通常为缓冲盐，当盐浓度不高，PH在中性附近，环境温度较高，容易生长细菌，因此对于5μm的色谱柱来说，2μm的筛板很容易堵塞，表现出来的就是柱压的缓慢上升）；样品为生物制品。

仪器报红后，首先把仪器内的积水清理干净，然后查看每一针样品的柱压，发现柱压每一针压力都在上升（在遇到诸如压力问题、出鬼峰或与原方法结果不一致时，不能主观判断仪器脏了或是样品不合格，首先做的就是调查。对于HPLC来说，压力线是一个重要参数）；重新接好色谱柱，使用含高盐的流动相低流速冲洗色谱柱0.5h（检测器一端未连接）柱压无明显变化，仍然很大，排除色谱柱自身原因（在离子交换中，增加盐浓度即增加洗脱能力，一般来说出峰不正常才考虑，由于是生物样品，有可能是洗脱能力弱导致某些成分未洗脱导致压力升高；检测器一端未连接是为了排除将检测器污染的可能）；之后打开purge阀，流速逐渐调节至5.0ml/min，压力为1.0bar左右，则证明吸液滤头没堵；之后拆开purge阀处的滤芯，超声5min，重新换上后，压力无明显变化，排除滤芯的问题；怀疑进样针的针座堵了，然后将进样针升起（进样针升起后，打开ALS门，进样针将不会下落），将六通阀处的5、6号管线换接，进行反冲，大约0.5h，重新接好管路，系统压力下降明显，平衡好色谱柱后，继续进样，发现每一针的压力在逐渐上升，随后，对流动相（一天一夜）过滤超声，对针座反冲，之后每一针的压力均正常。

（Purge阀打开压力正常，排除泵前没有堵塞；在针对仪器压力增加的问题，常用的是分段排查，找出堵塞点在哪儿，在进行有针对性的清理；在样品比较复杂的情况下，首先对针、针座进行排查、清理；除了关注进样后的压力还应与原先方法操作的压力进行比较；流动相为纯水相或者低比例有机相，最好临用新制，超过两天需重新超声过滤，实验结束后将管路及色谱柱冲洗干净，并将管路填充异丙醇或甲醇）

4、色谱柱对样品有吸附

在做实验的时候，发现系统适用性不通过（生物样品，前3后1），前几针峰面积依次增加，但第一针峰面积明显偏小，排除仪器自身原因，因为做其他样品时检测正常，怀疑可能是色谱柱吸附样品造成的，于是进行验证，连续进十针对照品，从第一针到最后一针的峰面积如下：3599、3975、3994、4015、4034、4055、4072、4075、4055，很明显第一针偏小，从第四针趋于稳定，因此可将sop进行升级，舍弃前面几针以排除干扰（或者购买别的厂家的色谱柱进行试验，检查结果，目前仅有一个厂家的色谱柱，或者调整方法）