聚合酶链反应(基因扩增):基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是模拟体内DNA复制过程,在体外特异性扩增DNA片段的一种技术。
二、PCR的应用领域
1、遗传病和某些疑难病的诊断
2、病原体的检测。某些恶性疾病一般用微生物学、生化和免疫 学技术无法查出病原体时,可用PCR来检查。
3、法医和刑侦鉴定。
4、癌基因的检查。
5、基因探针的制备。
6、基因组测序、染色体巡视。
7、cDNA库的构建。
8、基因突变的分析和定位诱变。
9、DNA重组。
10、基因的分享和克隆。
三、标准的PCR过程,分为三步:
1. DNA变性
(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
2. 退火
(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
3. 延伸
(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′??′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。