实验室霉菌毒素检测方法的建立

酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）是一种利用抗体和抗原之间的专一性将其结合，对目标化合物进行检测的方法。

优点：

特异性强、灵敏度高、操作简单，试验过程中无需昂贵的试验仪器等优点。但是该方法所需抗原、抗体的制备需要较高的专业技术水平，且通常只能检测一种物质，因此，多被用于快速筛选检查。目前，已有多种ELISA检测试剂盒问世，主要包括AFB1、OTA、ZEN、DON等。

缺点：

使用酶联免疫吸附法受到检测样品数量的影响，成本投入问题，不能满足生产一线检测需求。

胶体金免疫层析法

免疫层析法是20世纪80年代发展起来的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。其原理是将抗体固定在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose filter membrane，NC膜)的特定区域，当NC膜的一端浸入样品，在毛细管作用下，样品向前游动，当移动到有抗体的地方时，抗原与抗体特异性结合，一些标记材料带有颜色，所以结合的地方就会显示出相应的颜色，从而达到免疫诊断的效果。

优点：

胶体金免疫层析法具有方法操作简单、检测时间短，检测受干扰少，安全性高，污染少，不需要昂贵的检测仪器适合各类霉菌毒素的快速检测等优点。

缺点：

成本投入高，不能对霉菌毒素进行定量检测。

霉菌毒素酶标检测实验室具备的检测条件

1、ELISA专用高端酶标仪

2、霉菌毒素ELISA试剂盒

3、霉菌毒素快速检测卡

4、移液器、枪头、离心管

5、技术服务及配套解决方案

霉菌毒素检测方法的建立

（1）RT-6000酶标仪的操作程序

1、适用范围

本规程规定了RT-6000酶标仪的操作程序及维护保养注意事项。

2、引用文件：RT-6000酶标仪使用说明书

3、操作程序

3.1  开机，打开电源仪器处于自检状态，开机后，等待1分钟预热。

3.2  在酶标仪测量项目设置选项中，设置系统参数。

3.3  根据要求编辑测量项目。

3.4  将酶标板放入酶标仪上，选择测定项目和方法类型，然后在相应空位上点击实验序号。

3.5  单击“开始”按钮，酶标仪自动进行检测，测定完成后，结果自动显示在显示屏上。

3.6  单击打印，打印检测结果，或手工抄录结果。

3.7  检测结束，取出酶标板，清洁酶标仪后关机。

4、维护保养及注意事项

4.1  保持酶标仪以及工作环境清洁，光学部分防止尘埃污染。

4.2  液晶显示器要用柔软的布清洁

4.3  仪器应在15℃-30℃温度，相对湿度<85%环境下使用。

4.4  在测试过程中如果有错误发生，点击停止键，取消当前测试。

4.4关闭酶标仪，要按照规程操作进行，切勿直接关闭电源。

（2）样品处理方法

1、试剂盒的回温，室温（20-25℃）放置20min。

2、酶标记物工作液和洗液的准备

3、样品处理

3.1  原料和饲料预处理

采用高速粉碎机粉碎样品，过20目筛，分析天平准确称取所需检测量样品，置于100mL三角瓶，加入试剂盒规定量的甲醇溶液，摇床震荡15min，过滤取滤液，作为待检样液。

3.2  检测

3.2.1  取所需量的酶标板条

3.2.2  各反应孔依次加入50μL标准品和样品。

3.2.3  各反应孔依次加入50μL反应工作液，混匀后，25℃恒温避光孵育，时间按照试剂盒规定的时间。

3.2.4  洗板

3.2.5  加入100μL显色剂，25℃显色10min，显色完成后加入100μL终止液，酶标仪450nm处检测吸光值。

几种霉菌毒素检测方法特定对照分析表