您当前的位置:检测资讯 > 实验管理

国内外李斯特菌主要检验方法

嘉峪检测网        2016-07-07 11:08

目前,食品微生物检测体系主要包括,中国的国家标准(GB4789)和检验检疫行业标准(SN)、国际化标准化组织(ISO)方法、美国食品药品监督局(FDA)、美国农业部(USDA)、美国官方分析化学师协会(AOAC)、加拿大健康保护部(MFLP)、欧盟食品安全局(EFSA)等检测体系。
 
国内外李斯特菌主要检验方法
 
食品中单增李斯特菌(Li. monocytogenes)的传统检测方法主要包括增菌、分离和鉴定3 个环节。目前,分离环节常会采用显色培养基,使其菌落颜色不同于其它干扰菌,实现快速分离。鉴定常采用生化反应和血清学反应。目前,生化反应的鉴定技术多采用数值分类鉴定和自动化检测技术。
 
常见的李斯特菌快速检测技术
传统方法检测费时费力操作要求高,因此,李斯特菌快速检测技术和产品的开发是必要的。美国、欧盟等发达国家对微生物快速检测方法的研究和产品认证体系相对成熟,各种不同的快检系统和自动化仪器被推出,并得到广泛的应用。当前,李斯特菌快速检测方法为增菌以后,生化鉴定之前,对样本进行快速筛选,以缩小检测范围,减少检测任务,提高检测效率。快速检测方法主要包括酶底物显色技术、免疫学和分子生物学检测三大类。
 
 即用培养技术  即用培养基技术则省掉了前期准备工作,可以直接检测样品,从而节约了大量人力成本。目前,商业化的固定培养基技术主要有两种:纸片法和即用平皿法。纸片法是指将显色培养基固定于纸片上,上方再盖一层带有方格的透明薄膜,以方便计数。即用平皿法是指用已倒有培养基的平皿,接种操作与传统涂板、划线法一样。其优点和纸片法一样,即省掉了前期准备工作,可以直接接种培养。此类产品主要有3M的Petrifilm试纸片、良润生物的MicroFast®测试片、北京陆桥的Easy test 系列产品及绿洲生化的微生物测试片等,已被许多研究被证明与传统方法的检测结果无显著性差别。
 
免疫学检测法  该技术以抗原抗体免疫为基础,制备特异性克隆抗体检测细菌。目前国内外李斯特菌快速检测的此类技术主要包括:酶联荧光分析法(ELFA)、金标免疫层析技术、流式细胞技术等。ELFA 灵敏度比ELISA 高,并省去了ELISA 中的颜色反应,缩短反应时间;但缺点是成本较高,目前主要应用在自动酶联荧光免疫检测系统(VIDAS)上。金标免疫层析技术是将高度特异性抗单增李斯特菌抗原的抗体束缚在色原载体上,且可与固相支撑基质相分离。当检测样品中存在李斯特菌时,测试单元的试剂将会被展开,产生肉眼可见的确定性反应。流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数。该检测技术平均1min 即可得到检测结果,无需培养和样品制备,灵敏度可以达到1~100CFU,但仪器投入较大,检测成本相对较高,对样本的要求高,严重的制约这该技术在食品微生物检测中的应用。
 
国内外李斯特菌主要检验方法
 
分子学检测方法 主要包括核酸探针杂交技术、PCR 检测技术等。DNA 探针法是将2 条碱基互补的DNA 链在适当的条件下杂交,通过检测样品与标记性DNA 探针之间形成的杂交分子来检测样品中的单增李斯特菌,测定放射性或荧光强度即可得出样品中单增李斯特菌的个数。PCR 是近年来广泛应用的分子生物学检测方法,在单增李斯特菌的检测中以其遗传物质高度保守的核酸序列(常用的靶序列包括hly、actA、prfA等)设计引物进行扩增。该方法特异性好,但灵敏度低,对样品进行前处理后再进行扩增,可以提高检出率和检测灵敏度。国内外目前主要应用的PCR技术包括:实时荧光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒温扩增、RT-PCR 方法、IMS-PCR 检测技术等。
 
分享到:

来源:AnyTesting