培养和计数

（1）取上述经热激活处理的芽孢悬液，用灭菌纯化水进行10倍系列稀释，采用倾注法或涂布法进行芽孢计数。
（2）倾注法即取芽孢数在30～300cfu/ml稀释级的芽孢悬液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃融化的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
（3）涂布法即取适量（通常15～20ml）温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥，每一平皿表面接种芽孢数30～300cfu（接种量不少于0.1ml）。
（4）每稀释级至少制备2个平板。
（5）按照表1推荐的培养温度和培养时间培养。
（6）逐日点计和记录各平板的菌落数，并计算每个最小单位生物指示剂的平均芽孢数。

表1　生物指示剂的芽孢计数的试验条件*

*芽孢计数亦可按照经验证的试验条件进行。

结果判定　　

D值测定仪器

（1）用于不同灭菌方法生物指示剂的D值测定一般采用不同的仪器或程序。
（2）湿热灭菌用生物指示剂的D值测定常用的设备有两种，一种是抗力仪（能够实现短时升温和降温的灭菌器），该设备适用于纸片式、自含式、芽孢悬液形式等的生物指示剂。
（3）另一种是油浴仪（能够设定到100℃以上的恒温设备），该设备适用于芽孢悬液生物指示剂。
（4）为保证测定结果的准确性，抗力仪的各项参数应满足GB/T24628《医疗保健产品灭菌　生物与化学指示剂　测试设备》的要求。